转录因子(TFs)是一组在调节基因表达中起重要作用的细胞蛋白。它们做为传感器,调节细胞变化,将信号转换成基因表达。一种特定的TF常由多种上游蛋白调节。监测一种TF的激活对揭示信号通路和细胞调控的机制甚为重要。美国Signosis 公司研发的48种TF滤板法试剂监测TF的激活,与凝胶迁移试验不同,96个样本可在一个试验中分析。
A. 优点:
美国Signosis 公司基于自有知识产权技术研发的TF滤板法试剂,具有下列优势:
· 简单快速---比凝胶迁移试验简单、快速
· 高通量筛选---多个样品可在一个试验中得到分析
· 费用低廉---与基于ELISA的检测方法相比花费更少
· 定量比较---二个或以上样本可同时定量分析
B. 原理
美国Signosis 公司研发的TF滤板法检测试剂,特异的生物素标记的TF- DNA结合序列与核抽体物混合,形成TF-DNA复合物。滤板用于保留结合的DNA探针,除去游离的DNA探针。结合的预标记的DNA探针随后从滤板洗脱和收集,通过DNA板杂交用于定量分析。捕获的DNA探针进一步用辣根酶标记的链霉亲和素检测,在微孔板发光检测仪上读取发光度值(RLUs)。