miR-17-92基因簇编码有miR-17-5p、miR-17-3p、miR-18a、miR-19a、miR-19b、miR-20a和miR-92。这些miRNA的表达促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、诱导肿生成。最新研究表明这些miRNA的基本功能不仅表现在肿的形成而且表现在心肺和免疫系统的正常发育。已有许多PCR的方法分析miRNA的表达。参与许多生物学活动,其异常表达与不可治愈的疾病有关,是一类很有前途的标志物。有许多PCR方法分析miRNA的表达水平。基于自有专利技术,美国Signosis开发了一种高灵敏、高分辨的实时PCR方法,用于同时检测miRNA的表达,其应用寡核苷酸连接和基于实时PCR的SYBR green。该方法可用于总RNA或细胞裂解物中的miRNA表达的定量分析,无需进行cDNA转换。
A. 优点:
miR-17-92实时PCR检测试剂具有以下优点:
·分辨力强---可鉴别miR-17-92及其同源。
·无需RNA制备---细胞裂解无需RNA制备可直接用于分析。
·实时---分析可以实时监测。
·多重分析---8个miRNA可同时分析。
B. 原理:
该方法中,靶miRNA分子与二对oligo连接,形成RNA/DNA复合物。当序列完全匹配时,这二对oligo与miRNA连接,二对oligo的节点通过DNA酶连接。miRNA之间单个寡核苷酸的差异就会阻止杂交或连接。寡核苷酸对连接上后,连接分子可进行实时PCR。一种miRNA带有一种标示序列,标示序列用作扩增引物之一,同源而不同miRNA如miR-19a和miR-19b进行PCR可被鉴别。