miRNA靶基因报告载体

　　通过与mRNAs在特异位点的结合，切割靶位点或抑制转录(翻译)，MicroRNAs可调控基因表达。 MiRNA与靶的相互作用是由RNA诱导的沉默复合体(RISC)介导的。RISC介导的成熟miRNA与位点相互作用依赖于miRNA和靶位点的序列互补性以及在3 ' UTR结合位点的总数量。 许多重要的调节基因受miRNAs调控，如Ers受let-7, Bcl-2受miR15和miR16，ERs 受 miR206, TPM1 受 miR-21, 和 PTEN 受 miR-19a调控。 基于细胞分析方法的荧光素酶报告载体常用于监测受miRNAs调控的基因。 　　A. 优点: 　　MiRNA 荧光素酶报告载体具有以下优点: 　　· 功能性检测 –是一种功能性的分析方法，用于监测细胞内miRNA介导的靶基因的调控 　　· 可定量分析 - miRNAs介导的调控可以通过荧光素酶基因的表达进行定量监测 　　· 可构建稳定细胞系 –载体可用于构建表达报告基因的稳定细胞系. 　　B. 原理： 　　pLuc-3UTR报告载体是一系列基于荧光素酶报告的构建体，用于监测miRNA介导的细胞内靶基因调控。每个载体含有CMV启动子、荧光素酶基因、3 ' UTR 靶基因和SV40终止子序列。MiRNA的表达并与3 ' UTR结合，导致荧光素酶基因表达的抑制。因此miRNA介导的特异靶的调控可通过荧光素酶活性进行监测。比较二个样本荧光素酶活性，可解析调控，明确差异。