Let7同源miRNA实时PCR检测试剂

　　Let7家族调节从线虫到人的各种类生物的增殖和分化过程。成熟体(谓之let7a到let7i)与let7a序列在1到4位置有区别。同源体的表达水平不一样，其在器官发育和疾病起因上也不同。鉴别这些同源体将有助于阐明let7的功能。基于自有专利技术，美国Signosis开发了一种高灵敏、高分辨的实时PCR方法来测定miRNA的表达，同时分析let7同源体(Let7a, Let7b, Let7c, Let7d, Let7e, Let7f, Let7g 和 Let7i)。该方法应用寡核苷酸连接和基于实时PCR的SYBR green，其可用于总RNA或细胞裂解物中的miRNA表达的定量分析，无需进行cDNA转换。 　　A. 优点： 　　let7同源miRNA实时PCR检测试剂具有以下优点： 　　·分辨力强---可鉴别let7及其同源。 　　·无需RNA制备---细胞裂解无需RNA制备可直接用于分析。 　　·实时---分析可以实时监测。 　　·多重分析---8个miRNA可同时分析。 　　B. 原理： 　　该方法中，靶miRNA分子与二对oligo连接，形成RNA/DNA杂合体。当序列完全匹配时，这二对oligo与miRNA连接，二对oligo的节点通过DNA酶连接。miRNA之间单个寡核苷酸的差异就会阻止杂交或连接。寡核苷酸对连接上后，连接分子可进行实时PCR。一种miRNA带有一种标示序列，标示序列用作扩增引物之一，同源而不同miRNA进行PCR可被鉴别。