核提取试剂用于制备核提取物，是研究转录因子所需要用到的。核提取试剂可用于制备200次6孔培养板中细胞核的抽提，50次100mm培养皿中细胞的抽提。

　　microRNAs (miRNAs)在基因表达的调控方面具有重要作用。哺乳动物30%的基因由miRNAs调控。 人的染色体上确定有500多种 miRNAs，其中许多miRNA只相差一个或者几个核苷酸。 成熟miRNAs的表达是组织特异的。miRNAs丰度可相差几个数量级。 更重要的是miRNA表达的错误调控涉及到人的不可治愈症。 系统检测miRNA表达显示一些不可治愈症存在独有的特征。 　　A. 优点: 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7转录扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单---步骤简单、流畅 　　B. 原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同：(1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大(2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。 所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。 一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但是这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每条引物只识别miRNA一半的序列。其中的一个引物中含有标示序列(Tag)，另外一个引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两条引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者随后连接的失败。这也是T7-OLA技术产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一条引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两引物在T4连接酶的作用下，被连接成一个DNA片断。随后经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司miRNA芯片I试剂测定60个最有影响的miRNAs及其同源的表达。 步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA引导下两引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断。

　　Let7家族调节从线虫到人的各种类生物的增殖和分化过程。成熟体(谓之let7a到let7i)与let7a序列在1到4位置有区别。同源体的表达水平不一样，其在器官发育和疾病起因上也不同。鉴别这些同源体将有助于阐明let7的功能。基于自有专利技术，美国Signosis开发了一种高灵敏、高分辨的实时PCR方法来测定miRNA的表达，同时分析let7同源体(Let7a, Let7b, Let7c, Let7d, Let7e, Let7f, Let7g 和 Let7i)。该方法应用寡核苷酸连接和基于实时PCR的SYBR green，其可用于总RNA或细胞裂解物中的miRNA表达的定量分析，无需进行cDNA转换。 　　A. 优点： 　　let7同源miRNA实时PCR检测试剂具有以下优点： 　　·分辨力强---可鉴别let7及其同源。 　　·无需RNA制备---细胞裂解无需RNA制备可直接用于分析。 　　·实时---分析可以实时监测。 　　·多重分析---8个miRNA可同时分析。 　　B. 原理： 　　该方法中，靶miRNA分子与二对oligo连接，形成RNA/DNA杂合体。当序列完全匹配时，这二对oligo与miRNA连接，二对oligo的节点通过DNA酶连接。miRNA之间单个寡核苷酸的差异就会阻止杂交或连接。寡核苷酸对连接上后，连接分子可进行实时PCR。一种miRNA带有一种标示序列，标示序列用作扩增引物之一，同源而不同miRNA进行PCR可被鉴别。

　　通过与mRNAs在特异位点的结合，切割靶位点或抑制转录(翻译)，MicroRNAs可调控基因表达。 MiRNA与靶的相互作用是由RNA诱导的沉默复合体(RISC)介导的。RISC介导的成熟miRNA与位点相互作用依赖于miRNA和靶位点的序列互补性以及在3 ' UTR结合位点的总数量。 许多重要的调节基因受miRNAs调控，如Ers受let-7, Bcl-2受miR15和miR16，ERs 受 miR206, TPM1 受 miR-21, 和 PTEN 受 miR-19a调控。 基于细胞分析方法的荧光素酶报告载体常用于监测受miRNAs调控的基因。 　　A. 优点: 　　MiRNA 荧光素酶报告载体具有以下优点: 　　· 功能性检测 –是一种功能性的分析方法，用于监测细胞内miRNA介导的靶基因的调控 　　· 可定量分析 - miRNAs介导的调控可以通过荧光素酶基因的表达进行定量监测 　　· 可构建稳定细胞系 –载体可用于构建表达报告基因的稳定细胞系. 　　B. 原理： 　　pLuc-3UTR报告载体是一系列基于荧光素酶报告的构建体，用于监测miRNA介导的细胞内靶基因调控。每个载体含有CMV启动子、荧光素酶基因、3 ' UTR 靶基因和SV40终止子序列。MiRNA的表达并与3 ' UTR结合，导致荧光素酶基因表达的抑制。因此miRNA介导的特异靶的调控可通过荧光素酶活性进行监测。比较二个样本荧光素酶活性，可解析调控，明确差异。

　　miRNA参与许多生物学活动，其异常表达与不可治愈的疾病有关，是一类很有前途的标志物。有许多PCR方法分析miRNA的表达水平。基于自有专利技术，美国Signosis开发了一种高灵敏、高分辨的实时PCR方法，用于检测miRNA的表达，其应用寡核苷酸连接和基于实时PCR的SYBR green。该方法可用于总RNA或细胞裂解物中的miRNA表达的定量分析，无需进行cDNA转换。 　　A. 优点： 　　美国Signosis公司miRNA实时PCR检测试剂具有以下优点： 　　·便利---试剂盒包含了从细胞裂解到PCR所有试剂。 　　·无需RNA制备---细胞裂解物可直接用于反转录，尽管用总RNA更好。 　　·实时---分析可以实时监测 　　B. 原理： 　　该方法中，靶miRNA分子与二对oligo连接，形成RNA/DNA复合物。当序列完全匹配时，这二对oligo与miRNA连接，二对oligo的节点通过DNA酶连接。miRNA之间单个寡核苷酸的差异就会阻止杂交或连接。寡核苷酸对连接上后，连接分子可进行实时PCR。

　　一种多顺反子miRNA族miR-17-92在细胞增殖和血管生成的控制中起着重要作用，该族由7个miRNAs组成：miR-17-5p，miR-17-3p，miR-18a，miR-19a，miR-19b，miR-20a，miR-92。如E2F1基因，该族由原Ca基因c-Myc转录激活，由于二个表达的miRNAs抑制E2F1的翻译，E2F1蛋白的水平受这种反馈机制的调节，因此过量的E2F1的堆积受到阻止，凋亡的细胞状态或细胞分化受到控制。此外，c-Myc 介导的miR-17-92族的诱导，导致抗血管生成的溶血栓蛋白-1和相关蛋白的负调控，如结缔组织生长因子2，从而促进血管生成。近期研究表明，该组在脂肪细胞分化的克隆扩张期明显上调。miR-17-92族与许多类型肿瘤的致Ca基因有牵连。有效监测该组miRNAs的表达有助于更好理解miRNA族的改变对Ca发展的促进作用以及阐明miRNA活动的分子机制。 　　A.优点： 　　美国Signosis基于其自有专利技术的miRNA微孔板检测试剂具有下列优点： 　　·操作简单---做miRNA试验象做ELISA试验，无需用酶转换miRNA成cDNA，检测步骤只是孵育和洗涤。 　　·灵敏度高---较miRNA Northern blotting分析敏感100倍。 　　·分辨力强---在分辨同源miRNA 时，较Northern blot有更高的分辨力。 　　·差别定量---二个或二个以上特定miRNA表达的差异可定量分析。 　　B.原理： 　　基于自有专利miRNA微孔板检测中，一个miRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接，一个连接oligo与捕获oligo和待测的miRNA部分杂交，另一个连接oligo与检测oligo和待测的miRNA另一部分杂交，杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固者在微孔板上，再由辣根酶标记链酶亲和素和发光底物检测，这种杂交体结构对miRNA分子序列非常敏感，一个核苷酸的差异即会阻止杂交体的形成，从而可分辨同源miRNA，而Northern blot则很难鉴别同源miRNA，此外该方法的敏感性较Northern blot高。

　　小干扰RNA(siRNAs)是双链RNA分子，长度在20-25个核苷酸。2001年时表明合成的siRNAs能够诱导RNAi进入哺乳动物细胞，siRNAs引起了生物医学和药物研发的极大关注，从而被广泛应用于沉默基因表达。监测siRNA的运送和表达对保证敲除成功是非常重要的。Northern blot是分析这些分子常用的方法，但该方法不够敏感，操作相对繁琐。美国Signosis开发了一种高敏的siRNA微孔板检测方法，比Northern Blot敏感100倍，此外该方法只是简单的孵育，如同ELISA，更重要的是可以同时分析大量样本。根据客户提供的特定的siRNA序列，美国Signosis会设计一套oligos，然后提供给客户相应的检测试剂。 　　A.优点： 　　美国Signosis基于其自有专利技术的siRNA微孔板检测试剂具有下列优点： 　　·操作简单---做siRNA检测象做ELISA，整个试验步骤只是孵育和洗涤。 　　·灵敏度高---较siRNA Northern blotting分析敏感100倍。 　　·定量分析---特定siRNA的表达可以定量分析。 　　B.原理： 　　基于自有专利siRNA微孔板检测中，一个siRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接，其中一个连接oligo与捕获oligo和待测的siRNA部分杂交，另一个连接oligo与检测oligo和待测的siRNA另一部分杂交，杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固着在微孔板上，再由辣根酶标记的链酶亲和素和发光底物检测。

　　核提取试剂用于制备核提取物，是研究转录因子所需要用到的。核提取试剂可用于制备200次6孔培养板中细胞核的抽提，50次100mm培养皿中细胞的抽提。

　　Oligo-dT 96 mRNA捕获试剂 　　Oligo-dT 96 mRNA捕获试剂采用寡核苷酸包埋技术，从悬浮和贴壁细胞中纯化mRNA，是一种简单、低成本、快速的方法。该试剂盒纯化的mRNA可用于cDNA合成、PCR(CL-0002)和实时PCR(CL-0003)。 　　A. 优点: 　　Signosis的Oligo-dT 96 mRNA捕获试剂具有以下优点: 　　· 快速简单 – 试剂盒包含所有组分，mRNA可以用96孔板直接从细胞中捕获纯化。 　　· 成本低廉 – 一盒成本低廉的试剂可获得96种mRNA。 　　B. 原理： 　　Oligo-dT 96 mRNA捕获试剂可从各种类型细胞中快速纯化mRNA。该项技术是在预包被Oligo-dT的 96孔中，简单的加入细胞裂解液，mRNA与每孔中的Oligo-dT杂交，洗去未结合的，分离和纯化的mRNA再进一步被洗脱，用于cDNA合成和PCR。

　　研究基因表达常常需要RNA制备后再进行cDNA合成和PCR。不过要获得用于RNA制备的大量细胞之困难成为一些研究工作的瓶颈，如激光切割的样本，FACS分拣的细胞和在96孔板中培养的细胞。细胞数量有限(<2000个细胞)限制了RNA的制备。武汉中帜生物科技有限公司CLTM细胞裂解液使对细胞裂解物的处理不用RNA制备可直接用于反转录，用少量细胞制得的细胞裂解物足以很好的将RNA反转录成cDNA，进行随后的PCR分析或cDNA微孔板阵列分析。 　　A. 优点： 　　·操作简单——反转录勿需RNA制备，可直接在细胞裂解液中进行 　　·所用细胞数量少——少量细胞足可制备cDNA进行PCR 　　B. 原理： 　　缓冲液已优化可进行细胞裂解物制备和反转录。cDNA合成无需RNA预分离直接由细胞裂解物中的RNA制得。