小干扰RNA(siRNAs)是双链RNA分子,长度在20-25个核苷酸。2001年时表明合成的siRNAs能够诱导RNAi进入哺乳动物细胞,siRNAs引起了生物医学和药物研发的极大关注,从而被广泛应用于沉默基因表达。监测siRNA的运送和表达对保证敲除成功是非常重要的。Northern blot是分析这些分子常用的方法,但该方法不够敏感,操作相对繁琐。美国Signosis开发了一种高敏的siRNA微孔板检测方法,比Northern Blot敏感100倍,此外该方法只是简单的孵育,如同ELISA,更重要的是可以同时分析大量样本。根据客户提供的特定的siRNA序列,美国Signosis会设计一套oligos,然后提供给客户相应的检测试剂。 A.优点: 美国Signosis基于其自有专利技术的siRNA微孔板检测试剂具有下列优点: ·操作简单---做siRNA检测象做ELISA,整个试验步骤只是孵育和洗涤。 ·灵敏度高---较siRNA Northern blotting分析敏感100倍。 ·定量分析---特定siRNA的表达可以定量分析。 B.原理: 基于自有专利siRNA微孔板检测中,一个siRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接,其中一个连接oligo与捕获oligo和待测的siRNA部分杂交,另一个连接oligo与检测oligo和待测的siRNA另一部分杂交,杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固着在微孔板上,再由辣根酶标记的链酶亲和素和发光底物检测。