miR-17-92基因簇微孔板检测试剂

　　一种多顺反子miRNA族miR-17-92在细胞增殖和血管生成的控制中起着重要作用，该族由7个miRNAs组成：miR-17-5p，miR-17-3p，miR-18a，miR-19a，miR-19b，miR-20a，miR-92。如E2F1基因，该族由原Ca基因c-Myc转录激活，由于二个表达的miRNAs抑制E2F1的翻译，E2F1蛋白的水平受这种反馈机制的调节，因此过量的E2F1的堆积受到阻止，凋亡的细胞状态或细胞分化受到控制。此外，c-Myc 介导的miR-17-92族的诱导，导致抗血管生成的溶血栓蛋白-1和相关蛋白的负调控，如结缔组织生长因子2，从而促进血管生成。近期研究表明，该组在脂肪细胞分化的克隆扩张期明显上调。miR-17-92族与许多类型肿瘤的致Ca基因有牵连。有效监测该组miRNAs的表达有助于更好理解miRNA族的改变对Ca发展的促进作用以及阐明miRNA活动的分子机制。 　　A.优点： 　　美国Signosis基于其自有专利技术的miRNA微孔板检测试剂具有下列优点： 　　·操作简单---做miRNA试验象做ELISA试验，无需用酶转换miRNA成cDNA，检测步骤只是孵育和洗涤。 　　·灵敏度高---较miRNA Northern blotting分析敏感100倍。 　　·分辨力强---在分辨同源miRNA 时，较Northern blot有更高的分辨力。 　　·差别定量---二个或二个以上特定miRNA表达的差异可定量分析。 　　B.原理： 　　基于自有专利miRNA微孔板检测中，一个miRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接，一个连接oligo与捕获oligo和待测的miRNA部分杂交，另一个连接oligo与检测oligo和待测的miRNA另一部分杂交，杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固者在微孔板上，再由辣根酶标记链酶亲和素和发光底物检测，这种杂交体结构对miRNA分子序列非常敏感，一个核苷酸的差异即会阻止杂交体的形成，从而可分辨同源miRNA，而Northern blot则很难鉴别同源miRNA，此外该方法的敏感性较Northern blot高。