microRNAs (miRNAs)在基因表达的调控方面具有重要作用。哺乳动物30%的基因由miRNAs调控。 人的染色体上确定有500多种 miRNAs，其中许多miRNA只相差一个或者几个核苷酸。 成熟miRNAs的表达是组织特异的。miRNAs丰度可相差几个数量级。 更重要的是miRNA表达的错误调控涉及到人的不可治愈症。 系统检测miRNA表达显示一些不可治愈症存在独有的特征。 　　A. 优点: 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7转录扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单---步骤简单、流畅 　　B. 原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同：(1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大(2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。 所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。 一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但是这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每条引物只识别miRNA一半的序列。其中的一个引物中含有标示序列(Tag)，另外一个引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两条引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者随后连接的失败。这也是T7-OLA技术产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一条引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两引物在T4连接酶的作用下，被连接成一个DNA片断。随后经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司miRNA芯片I试剂测定60个最有影响的miRNAs及其同源的表达。 步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA引导下两引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断。

　　Let7家族调节从线虫到人的各种类生物的增殖和分化过程。成熟体(谓之let7a到let7i)与let7a序列在1到4位置有区别。同源体的表达水平不一样，其在器官发育和疾病起因上也不同。鉴别这些同源体将有助于阐明let7的功能。基于自有专利技术，美国Signosis开发了一种高灵敏、高分辨的实时PCR方法来测定miRNA的表达，同时分析let7同源体(Let7a, Let7b, Let7c, Let7d, Let7e, Let7f, Let7g 和 Let7i)。该方法应用寡核苷酸连接和基于实时PCR的SYBR green，其可用于总RNA或细胞裂解物中的miRNA表达的定量分析，无需进行cDNA转换。 　　A. 优点： 　　let7同源miRNA实时PCR检测试剂具有以下优点： 　　·分辨力强---可鉴别let7及其同源。 　　·无需RNA制备---细胞裂解无需RNA制备可直接用于分析。 　　·实时---分析可以实时监测。 　　·多重分析---8个miRNA可同时分析。 　　B. 原理： 　　该方法中，靶miRNA分子与二对oligo连接，形成RNA/DNA杂合体。当序列完全匹配时，这二对oligo与miRNA连接，二对oligo的节点通过DNA酶连接。miRNA之间单个寡核苷酸的差异就会阻止杂交或连接。寡核苷酸对连接上后，连接分子可进行实时PCR。一种miRNA带有一种标示序列，标示序列用作扩增引物之一，同源而不同miRNA进行PCR可被鉴别。

　　通过与mRNAs在特异位点的结合，切割靶位点或抑制转录(翻译)，MicroRNAs可调控基因表达。 MiRNA与靶的相互作用是由RNA诱导的沉默复合体(RISC)介导的。RISC介导的成熟miRNA与位点相互作用依赖于miRNA和靶位点的序列互补性以及在3 ' UTR结合位点的总数量。 许多重要的调节基因受miRNAs调控，如Ers受let-7, Bcl-2受miR15和miR16，ERs 受 miR206, TPM1 受 miR-21, 和 PTEN 受 miR-19a调控。 基于细胞分析方法的荧光素酶报告载体常用于监测受miRNAs调控的基因。 　　A. 优点: 　　MiRNA 荧光素酶报告载体具有以下优点: 　　· 功能性检测 –是一种功能性的分析方法，用于监测细胞内miRNA介导的靶基因的调控 　　· 可定量分析 - miRNAs介导的调控可以通过荧光素酶基因的表达进行定量监测 　　· 可构建稳定细胞系 –载体可用于构建表达报告基因的稳定细胞系. 　　B. 原理： 　　pLuc-3UTR报告载体是一系列基于荧光素酶报告的构建体，用于监测miRNA介导的细胞内靶基因调控。每个载体含有CMV启动子、荧光素酶基因、3 ' UTR 靶基因和SV40终止子序列。MiRNA的表达并与3 ' UTR结合，导致荧光素酶基因表达的抑制。因此miRNA介导的特异靶的调控可通过荧光素酶活性进行监测。比较二个样本荧光素酶活性，可解析调控，明确差异。

　　miRNA参与许多生物学活动，其异常表达与不可治愈的疾病有关，是一类很有前途的标志物。有许多PCR方法分析miRNA的表达水平。基于自有专利技术，美国Signosis开发了一种高灵敏、高分辨的实时PCR方法，用于检测miRNA的表达，其应用寡核苷酸连接和基于实时PCR的SYBR green。该方法可用于总RNA或细胞裂解物中的miRNA表达的定量分析，无需进行cDNA转换。 　　A. 优点： 　　美国Signosis公司miRNA实时PCR检测试剂具有以下优点： 　　·便利---试剂盒包含了从细胞裂解到PCR所有试剂。 　　·无需RNA制备---细胞裂解物可直接用于反转录，尽管用总RNA更好。 　　·实时---分析可以实时监测 　　B. 原理： 　　该方法中，靶miRNA分子与二对oligo连接，形成RNA/DNA复合物。当序列完全匹配时，这二对oligo与miRNA连接，二对oligo的节点通过DNA酶连接。miRNA之间单个寡核苷酸的差异就会阻止杂交或连接。寡核苷酸对连接上后，连接分子可进行实时PCR。

　　miR-17-92基因簇编码有miR-17-5p、miR-17-3p、miR-18a、miR-19a、miR-19b、miR-20a和miR-92。这些miRNA的表达促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、诱导肿生成。最新研究表明这些miRNA的基本功能不仅表现在肿的形成而且表现在心肺和免疫系统的正常发育。已有许多PCR的方法分析miRNA的表达。参与许多生物学活动，其异常表达与不可治愈的疾病有关，是一类很有前途的标志物。有许多PCR方法分析miRNA的表达水平。基于自有专利技术，美国Signosis开发了一种高灵敏、高分辨的实时PCR方法，用于同时检测miRNA的表达，其应用寡核苷酸连接和基于实时PCR的SYBR green。该方法可用于总RNA或细胞裂解物中的miRNA表达的定量分析，无需进行cDNA转换。 　　A. 优点： 　　miR-17-92实时PCR检测试剂具有以下优点： 　　·分辨力强---可鉴别miR-17-92及其同源。 　　·无需RNA制备---细胞裂解无需RNA制备可直接用于分析。 　　·实时---分析可以实时监测。 　　·多重分析---8个miRNA可同时分析。 　　B. 原理： 　　该方法中，靶miRNA分子与二对oligo连接，形成RNA/DNA复合物。当序列完全匹配时，这二对oligo与miRNA连接，二对oligo的节点通过DNA酶连接。miRNA之间单个寡核苷酸的差异就会阻止杂交或连接。寡核苷酸对连接上后，连接分子可进行实时PCR。一种miRNA带有一种标示序列，标示序列用作扩增引物之一，同源而不同miRNA如miR-19a和miR-19b进行PCR可被鉴别。

　　细胞因子是信号分子，在细胞生长、分化、基因表达、迁移、免疫和炎症的许多生物过程中发挥重要的作用。细胞因子由细胞分泌，与细胞表面受体结合，激活细胞信号传导通路，传递细胞间的讯息。细胞因子的功能异常导致许多疾病，如关节炎、急慢性肝病、肠炎、心脏相关疾病。许多细胞因子常常涉及一种生物学或疾病过程。因此全面分析多种细胞因子的表达可以有效揭示疾病的潜在机制。人细胞因子微孔板阵列试剂以高通量的方式同时监测31种人类细胞因子，该方法快速敏感的同时定量检测不同样本多种细胞因子的水平。 　　A. 优点: 　　· 多重复合—— 一次试验可同时测定4份样品的23种细胞因子 　　· 敏感性高——只需少量样本 　　· 勿需贵重仪器——与珠式方法不同，不需要贵重仪器 　　· 操作简单——试剂盒包括预包被板等所有组分 　　B. 原理： 　　96孔白板分成3个区，每个区有4列，每个区31种特异的细胞因子捕获抗体分别包被在31个孔，1孔未包被任何抗体用作空白对照。样品如细胞培养悬液、细胞裂解液、组织匀浆、血清或血浆样品与微孔板温育，捕获的细胞因子蛋白用混合的生物素化抗体同时检测，待测样本与捕获抗体和检测抗体结合温育后，洗涤除去未接合的标记抗体，加入酶及化学发光底物，用微孔板化学发光检测仪测定发光度值，每种特异的细胞因子表达水平与发光强度成正比。 　　A. 优点: 　　· 多重复合—— 一次试验可同时测定4份样品的23种细胞因子 　　· 敏感性高——只需少量样本 　　· 勿需贵重仪器——与珠式方法不同，不需要贵重仪器 　　· 操作简单——试剂盒包括预包被板等所有组分 　　B. 原理： 　　96孔白板分成3个区，每个区有4列，每个区31种特异的细胞因子捕获抗体分别包被在31个孔，1孔未包被任何抗体用作空白对照。样品如细胞培养悬液、细胞裂解液、组织匀浆、血清或血浆样品与微孔板温育，捕获的细胞因子蛋白用混合的生物素化抗体同时检测，待测样本与捕获抗体和检测抗体结合温育后，洗涤除去未接合的标记抗体，加入酶及化学发光底物，用微孔板化学发光检测仪测定发光度值，每种特异的细胞因子表达水平与发光强度成正比。

　　pMiR-LucTM是一系列基于荧光素酶的报告载体，用于定量测定细胞中的miRNA表达。每种载体含有CMV启动子、荧光素酶基因、独特的3 ' UTR miRNA靶位点和SV40终止子序列。 靶位点是与特定miRNA完全互补的序列。 当miRNA表达时，miRNA与该序列结合，导致荧光素酶基因表达的抑制。 因此，荧光素酶的活性代表miRNA的表达的活性。 当pMiR-Luc报告载体转染哺乳动物细胞时，可用于检测内源性的miRNA表达和活性或者用于监测miRNAs的上调或下调。 　　A. 优点: 　　MiRNA 荧光素酶报告载体具有以下优点: 　　· 功能性检测 –是一种功能性的分析方法，用于监测细胞内的miRNA表达. 　　· 可定量分析 - miRNAs表达和活性通过荧光素酶基因表达的抑制进行监测. 　　· 可构建稳定细胞系 –载体可用于构建表达报告基因的稳定细胞系 　　B. 原理： 　　MiRNA在荧光素酶RNA下游的3' UTR与靶位点结合，抑制荧光素酶表达，使酶活性下降。 通过比较二个样品中的酶的活性， miRNA是上调还是下调可以定量测定。MiRNA报告载体见下表(如需要表中未列出的，可订制)。

　　microRNAs (miRNAs)是非编码的小分子， 30%哺乳动物的基因由miRNAs调控。 到目前为止，小鼠的染色体上已确定有数百种 miRNAs，其中许多miRNA只相差一个或者几个核苷酸。 成熟miRNAs的表达是组织特异的。miRNAs丰度可相差几个数量级。美国Signosis公司小鼠芯片可检测119种小鼠的miRNAs。 　　A. 优点: 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7转录扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单–--步骤简单、流畅 　　B. 原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同：(1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大 (2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每个引物只识别miRNA一半的序列。其中的一个引物中含有标示序列(Tag)，另外一个引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两个引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者连接失败。这也是T7-OLA技术的产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一个引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两个引物在T4连接酶的作用下，被连接成一个DNA片断。随后经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司小鼠miRNA芯片试剂测定119个鼠miRNAs及其同源的表达。步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA引导下两个引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断。

　　Oligo-dT 96 mRNA捕获试剂 　　Oligo-dT 96 mRNA捕获试剂采用寡核苷酸包埋技术，从悬浮和贴壁细胞中纯化mRNA，是一种简单、低成本、快速的方法。该试剂盒纯化的mRNA可用于cDNA合成、PCR(CL-0002)和实时PCR(CL-0003)。 　　A. 优点: 　　Signosis的Oligo-dT 96 mRNA捕获试剂具有以下优点: 　　· 快速简单 – 试剂盒包含所有组分，mRNA可以用96孔板直接从细胞中捕获纯化。 　　· 成本低廉 – 一盒成本低廉的试剂可获得96种mRNA。 　　B. 原理： 　　Oligo-dT 96 mRNA捕获试剂可从各种类型细胞中快速纯化mRNA。该项技术是在预包被Oligo-dT的 96孔中，简单的加入细胞裂解液，mRNA与每孔中的Oligo-dT杂交，洗去未结合的，分离和纯化的mRNA再进一步被洗脱，用于cDNA合成和PCR。

　　肌钙蛋白是三种蛋白——肌钙蛋白T、I和C的复合体，其结合到横纹肌的细丝(肌动蛋白)上，通过钙结合量调控肌肉收缩。肌细胞(心脏或骨骼肌)受损时，游离肌钙蛋白亚单位与肌钙蛋白复合体一起释放入血液。肌钙蛋白亚单位I有三种同型异构体; 二种在骨骼肌，一种在心肌。 由于组织特异性，心脏肌钙蛋白I(cTnI) 对急诊室(ED)就诊的胸口痛患者的鉴别诊断具有实用价值，是诊断急性心肌梗塞(AMI)首选的生物标志物。心脏TnI与CK-MB一样有类似的释放方式(疼痛发作后4-6个小时，梗塞后大约12个到24个小时达到高峰)。然而cTnI在相当长的时期(6-10天) 依然维持高水平，因而对心脏损害的诊断提供一个较长的窗口期。武汉中帜生物科技有限公司cTnI酶免法可快速，敏感和可靠的定量检测心脏特异肌钙蛋白。试剂的灵敏度为1.0 ng/ml，不与人心脏肌钙蛋白T或骨骼肌钙蛋白T或I交叉。 　　A. 优点： 　　· 性价比高——高质量，低价格 　　· 高效灵活——多个样品可同时分析，灵活确定分析试样的数量 　　· 特异性强——优选高度特异的针对cTnI的配对抗体 　　· 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 　　B.技术原理 　　肌钙蛋白I 试剂为固相酶免法。方法采用针对cTnI不同抗原决定簇的三种鼠单克隆抗体做为微孔板的固相捕获抗体，辣根过氧化物酶(HRP)标记的鼠抗cTnI单克抗体做检测抗体，待测样品中的cTnI可同时与捕获抗体和标记抗体反应。孵育后，洗去未结合的标记抗体。加入HRP底物TMB产生蓝色反应，加入终止液后转成黄色。cTnI的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比，450nm处测定吸光值进行定量。 　　A. 优点： 　　· 性价比高——高质量，低价格 　　· 高效灵活——多个样品可同时分析，灵活确定分析试样的数量 　　· 特异性强——优选高度特异的针对cTnI的配对抗体 　　· 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 　　B.技术原理 　　肌钙蛋白I 试剂为固相酶免法。方法采用针对cTnI不同抗原决定簇的三种鼠单克隆抗体做为微孔板的固相捕获抗体，辣根过氧化物酶(HRP)标记的鼠抗cTnI单克抗体做检测抗体，待测样品中的cTnI可同时与捕获抗体和标记抗体反应。孵育后，洗去未结合的标记抗体。加入HRP底物TMB产生蓝色反应，加入终止液后转成黄色。cTnI的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比，450nm处测定吸光值进行定量。