多重转录因子（TF）报告基因实时PCR检测试剂I

　　转录因子(TF)的转录活性常常是通过报告载体测定的，载体含有TF的顺式因子(DNA结合序列)和荧光素酶样的报告基因。报告基因导入细胞，激活的TF与顺式因子结合，介导报告基因的启动。这种启动可以通过生化分析报告基因的产物进行测定。然而这是一种单项测定，一次测一个TF。由于细胞的变化会导致多种TF的激活，检测这些TF就需要多次转染和生化测定。此外，由于被导入到不同的细胞培养孔，还需要标准化规范转染。美国Signosis 公司基于自有专利开发一种多重转录因子(TF)报告基因实时PCR检测试剂以同时检测多种TF，检测试剂中所选24种TF代表了大多重要的信号转导通路。在多重转录因子报告基因实时PCR检测试剂I中，24种TF报告载体混合物是一次性转染入细胞。24种TF活性用实时PCR SYBR green同时检测，采用试剂盒内自带的CLTM细胞裂解液，直接用细胞裂解物，勿需进行RNA制备。 　　A. 优点: 　　美国Signosis 公司基于自有专利技术研发的多重转录因子报告基因实时PCR检测试剂，具有下列优势： 　　· 基于细胞的方法---基于细胞的方法检测TF 的活性 　　· 多重复合---24种TF活性可一次转染，同时检测 　　· 无需RNA制备---细胞裂解物可直接用于cDNA合成 　　· 定量比较---二个或以上样本可同时用实时PCR定量分析 　　B. 原理 　　多重转录因子报告基因实时PCR检测试剂I是一种实时方法，可同时定量检测24种TF活性。该技术中，构建一系列报告载体，每一种含有一个顺序因子和针对一种特异TF的载体标识序列。当载体做为文库加入96孔板某一孔，TF的激活将使其与相应的载体结合，介导标示序列的表达。细胞裂解物制备后，转录成cDNA，再进行实时PCR，TF的差异通过二个样本的比较进行区别。