结合启动子的TF微孔板阵列检测试剂I

　　要明确与特定启动子结合的转录因子(TFs)，或明确是通过上游的启动子调控特定基因表达的转录因子，常用二种方法。一种，启动子内电识别的转录因子DNA结合位点进行凝胶迁移试验。第二种，除去或移除某个转录因子的结合位点，以测定与启动子连接的报告体的表达是增加还是减少，通常，要构建一系列启动子缺失或突变的报告体，因为一个或一些转录因子在启动子上有多个结合位点。美国Signosis 公司开发了一种快速方法，通过一种变换的TF检测微孔板阵列方法便于启动子的定性，这种方法将检测48种TF是否与启动子结合。 　　A. 优点: 　　美国Signosis 公司基于自有知识产权技术研发的结合启动子的TF微孔板阵列检测试剂，具有下列优势： 　　· 多重复合---单一一次试验可明确48种TF与特定启动子的结合 　　· 步骤简单---探针孵育、柱离心、板杂交和HRP检测 　　B. 原理 　　启动子的TF微孔板阵列检测试剂是Signosis转录因子活性检测微孔板阵列试剂I的竞争法。在转录因子活性检测微孔板阵列试剂I，如果48种靶转录因子存在于待测样品中，就会形成48种类型的复合物，每种转录因子带有相应的生物素标记的oligo(与凝胶迁移试验中的复合物一样)，用柱离心从复合物中分离未结合的游离的生物素标记的oligo，柱洗脱转录因子结合的oligo，用于板杂交，杂交上的DNA有生物素标记oligo，捕获的oligo用链酶亲和素和化学发光底物检测。如果不存在转录因子，就不能形成复合物，在随后的生物素标记的oligo中检测不到TF。在结合启动子的TF微孔板阵列检测试剂中，含有感兴趣的启动子PCR片段，与一套48种生物素标记的oligo混合，48种oligo与待测标本中的48种TF对应。如果DNA片段含有TF结合序列，就与生物素标记的oligo竞争与样本中的TF结合，不形成或少形成复合物，也就检测不到或少检测到TF，通过竞争质粒或DNA片段的存在与否，启动子结合的TF可被识别。