转录因子(TFs)是一组细胞蛋白,在调控基因表达中起着重要作用,其做为传感器,监测细胞的变化,把信号转变成基因表达。一种特定的细胞信号通道通常可以同时激活多种转录因子,一种特定基因的表达在多种转录因子的控制之下,因此同时检测多种转录因子的活性对理解潜在于细胞信号传导和基因表达之中的细胞调控的分子机制至关重要。美国Signosis 公司TF活性检测微孔板阵列试剂I 用于检测48种不同TFs的活性,包括NFkB、AP1、HIF1和p53。
A. 优点:
美国Signosis 公司基于自有知识产权技术研发的TF活性检测微孔板阵列试剂,具有下列优势:
· 多重复合---单一一次试验可测定48种TFs的活性
· 定量比较---二个样本的差异可以定量分析和比较
· 步骤简单---探针孵育、柱离心、板杂交和HRP检测
· 无需特殊仪器---无需贵重仪器如Luminex
B. 原理
TF活性检测微孔板阵列试剂用于同时检测多种转录因子的活性。本技术中,基于TF-DNA结合位点的一致性序列,制备一系列生物素标记的探针,探针混合物与核抽提物混合,通过柱离心纯化,各探针指向其相应的TF,形成TF/探针复合物,通过柱离心纯化,可以方便的与游离探针区分开来。通过板杂交,结合的探针从混合物中分离并分析,每一板孔特定的预包被上相应的探针序列。