维甲酸X受体是核受体的一种,为9—顺式视黄醇酸激活。RXR与其它核受体形成二聚体,如与CAR、FXR、LXR、PPAR、RAR、TR和VDR形成复合物,激活后,复合物与RXR识别位点结合,启动靶基因转录,通过调控RXR活性与共激活剂和共抑制剂的相互作用,调控RXR活性。通过包含的带Myc标签的RXR表达载体,Signosis 的RXR 免疫共沉淀试剂盒用于分析RXR和RXR相关蛋白的相互作用。
A. 优点:
RXR 免疫共沉淀试剂盒具有下列优势:
· 蛋白相互作用的功能性检测方法——可用于RXR与其它蛋白的相互作用。
· 噪音低—— WB检测时非特异信号非常低。
· 快速——蛋白用抗Myc磁珠沉淀,无需预分离步骤,缩短孵育时间。
·简便——试剂盒包含全部试剂组份。
B. 原理:
Myc标签的RXR表达载体用于转染靶细胞。转染后,RXR表达Myc抗原决定部位标签,与反应蛋白结合。RXR复合物与相应蛋白可以快速高效的与抗Myc抗体免疫共沉淀,共沉淀复合物通过磁力架进一步与未结合的蛋白分开,洗涤后,复合物高效彻底的从磁珠上洗脱下来,用SDS-PAGE分离以进一步WB分析。磁珠上固相的Myc抗体在低PH洗脱条件下通过阻止轻链和重链的解离提供更好的WB检测。