细胞色素P450是一类基因超家族酶系,在多种化学物代谢中起着重要作用,这些包括化学物、甾醇、脂肪酸。P450家族中有许多可以激活不可治愈症的原,其在对各种环境化合物和药物的应答中出现高度差异性表达。由于大鼠常被选作研究毒理的动物模型,检测毒性相关的P450表达对揭示潜在的机制至关重要。美国Signosis公司大鼠p450 cDNA微孔板阵列检测试剂可检测22种CYP基因的表达。
A. 优点:
美国Signosis公司基于其自有的cDNA微孔板阵列专利技术研发的大鼠p450 cDNA微孔板芯片检测试剂具有以下优点:
·操作简单---做基因表达试验像做ELISA酶免试验一样简单。
·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。
·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。
B. 原理:
美国Signosis 公司自有的cDNA微孔板阵列专利检测技术是基于微孔板杂交的检测方法,该方法是将mRNA反转录成cDNA来检测多种基因的表达。与芯片分析方法相似,加入生物素-dUTP后,总RNA先转录成生物素标记的cDNA。通过预包被在微孔板上的特异的寡核酸,将靶基因捕获到微孔板上(而不是膜上)。捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物,cDNA的浓度与待测标本的发光强度成正比。