Akt是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在介导多种细胞活动的信号中发挥重要作用,这些细胞活动包括细胞生长、分化、细胞周期、转录和糖代谢。该酶由PI3K激活,激活的Akt3可引发广泛的蛋白底物磷酸化,如GSK-3、IKK-ß、BAD、MDM2、mTOR、CASP9、p21Cip1、p27Kip1。Akt底物的差异表达有不同的表型结果。美国Signosis公司的Akt通路-调控的cDNA微孔板阵列检测试剂为检测这些基因的表达提供了一种简单的方法。
A. 优点:
美国Signosis公司基于其自有的cDNA微孔板阵列专利技术研发的人AKT通路cDNA微孔板阵列检测试剂具有以下优点:
·操作简单---做基因表达试验像做ELISA酶免试验一样简单。
·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。
·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。
B. 原理:
美国Signosis 公司自有的cDNA微孔板阵列专利检测技术是基于微孔板杂交的检测方法,该方法是将mRNA反转录成cDNA来检测多种基因的表达。与芯片分析方法相似,加入生物素-dUTP后,总RNA先转录成生物素标记的cDNA。通过预包被在微孔板上的特异的寡核酸,将靶基因捕获到微孔板上(而不是膜上)。捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物,cDNA的浓度与待测标本的发光强度成正比。