p53蛋白在维持正常细胞有序增殖、生长、分化过程中起着重要作用。通常p53蛋白在正常细胞中处于很低的水平,是一种非活性状态,细胞压力时聚集在核内与特异DNA结合以对细胞压力进行反应。已知p53蛋白可诱导和抑制100多个靶基因的表达。p53基因突变是癌症最常发生的基因事件,其激活p53,导致靶基因表达的混乱。因此p53靶基因表达的检测将有助于p53功能的研究。美国Signosis公司的人p53-调控的cDNA微孔板阵列检测试剂可检测20 多种p53靶基因的表达。
A. 优点:
美国Signosis公司基于其自有的cDNA微孔板阵列专利技术研发的P53-调控的cDNA微孔板阵列检测试剂具有以下优点:
·操作简单---做基因表达试验像做ELISA酶免试验一样简单。
·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。
·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。
B. 原理:
美国Signosis 公司自有的cDNA微孔板阵列专利检测技术是基于微孔板杂交的检测方法,该方法是将mRNA反转录成cDNA来检测多种基因的表达。与芯片分析方法相似,加入生物素-dUTP后,总RNA先转录成生物素标记的cDNA。通过预包被在微孔板上的特异的寡核酸,将靶基因捕获到微孔板上(而不是膜上)。捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物,cDNA的浓度与待测标本的发光强度成正比。