检测基因表达常常需要有许多步骤,RNA制备、反转录和PCR。为简化基因表达分析,美国Signosis研发了一种多生物素信号放大技术(MBSA),基于这项技术,基因表达可以直接用细胞裂解物测定而无需RNA制备、反转录和PCR。美国Signosis已经研发了定量测定TNF和IL-6检测试剂,现在可以提供定量测定各种基因mRNA微孔板检测的定制服务,只需客户提供基因信息如基因的ID,即可提供完整的检测试剂。
A. 优点:
美国Signosis mRNA微孔板定量检测试剂具有下列优势
· 准确定量---mRNA用体外的RNA做参照,进行定量测定。
· 灵敏度高---在较宽的动力学范围内可测定少至500个分子。
· 操作简单---细胞裂解物或总RNA可直接用于板杂交,其无需总RNA制备和mRNA到cDNA的酶促转换, 整个检测步骤主要是“孵育和洗涤”。
B. 原理:
在MBSA中,多生物素加到聚合物上,其含有标识的互补序列,可以与连接序列结合。连接序列含有靶序列和标识序列。一条连接序列具有共同的标识序列,但带有不同的靶序列以与靶基因不同区域杂交。因此具有二个层级的放大:多个区域和多个生物素。RNA微孔板检测结合MBSA,靶mRNA通过多个捕获oligo捕获在微孔板上,捕获的RNA分子与多个连接分子杂交,靶定mRNA不同区域,MBSA随后与连接分子杂交,捕获的生物素分子用链霉亲和素酶结合物及发光底物检测。