基因表达是在单个细胞水平进行调控,需要有多种方法分析单个细胞如干细胞、神经元、发育组织、激光捕获切片的基因表达方式。SYBR Green 是最广泛应用的双链DNA特异染料,是实时PCR报告染料。Signosis公司研发了一种单个细胞的SYBR Green实时RT-PCR试剂,不需要RNA制备,而是直接用细胞裂解物。该试剂盒是一种敏感、定量、价廉的方法,用以实时监测PCR反应。除了CLTM细胞裂解液试剂盒包括cDNA合成和PCR扩增的所有试剂。
A. 优点:
美国Signosis公司直接用细胞裂解液的RT-PCR试剂具有以下优点:
·便利---从细胞裂解、反转录直到PCR,试剂盒包含了所有试剂。
·无需RNA制备---细胞裂解液可直接用于反转录。
·功能强大---该试剂可获得全长的cDNA。
·实时---分析可以实时监测
B. 原理:
缓冲液已优化适于进行细胞裂解物制备和RT-PCR。