干细胞与其它类型细胞有着不同的重要特性。通过细胞定向及分化成为不同的细胞系,干细胞是一群能够自我更新的非特异化的细胞。此外,干细胞在体内修复系统、唤醒特定细胞、维持再生器官的正常转换中发挥着作用。识别一组细胞相关基因可作为干细胞生物分子标记物,以助于干细胞研究。不过,干细胞来源的限制阻碍了对这些基因进行方便的测定。美国Signosis公司研发的单个干细胞基因表达检测试剂通过将RNA扩增和信号放大相结合,极大的增加了检测的敏感性。该试剂可用来同时分析8个干细胞相关基因的表达。
A. 优点:
美国Signosis公司基于其自有专利的单个细胞基因表达检测技术,研发出单个干细胞基因表达检测试剂具有以下优点:
·敏感性高---少量的干细胞足以检测8个基因的表达。
·人鼠样本---可分析人和鼠干细胞。
·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。
B. 原理:
美国Signosis 公司研发的高敏检测方法是通过二个水平的放大来检测单个细胞基因的表达。RNA模板的扩增和信号放大。细胞裂解物中的RNA首先反转录成cDNA,随后T7RNA扩增。扩增的RNA被捕获在96孔板上。检测时,信号被多生物素分子和链酶亲和素酶结合物进一步放大。微孔板发光检测仪检测发光强度(RLUs)。基因表达水平与发光强度成正比。