研究基因表达常常需要RNA制备后再进行cDNA合成和PCR。不过要获得用于RNA制备的大量细胞之困难成为一些研究工作的瓶颈,如激光切割的样本,FACS分拣的细胞和在96孔板中培养的细胞。细胞数量有限(<2000个细胞)限制了RNA的制备。 美国Signosis公司CLTM细胞裂解液使对细胞裂解物的处理不用RNA制备可直接用于反转录,用少量细胞制得的细胞裂解物足以很好的将RNA反转录成cDNA,进行随后的PCR分析或cDNA微孔板阵列分析。
A. 优点:
美国Signosis公司CLTM细胞裂解液具有以下优点:
·操作简单---反转录勿需RNA制备,可直接在细胞裂解液中进行。
·所用细胞数量少---少量细胞足可制备cDNA进行PCR。
B. 原理:
缓冲液已优化可进行细胞裂解物制备和反转录。cDNA合成无需RNA预分离直接由细胞裂解物中的RNA制得。