直接用细胞裂解物分析人NFkB调控的cDNA检测试剂

　　NFkB 是一种广泛存在的转录因子，在细胞对各种刺激的反应中起着重要作用，这些刺激包括：压力、细胞因子、自由基、紫外线照射、氧化的LDL、细菌和病毒的抗原。NFkB的异常调节与炎症、自身免疫性疾病、脓毒性休克、病毒感染和不适当的免疫进展相关联。NFkB激活时，与其抑制剂IkB解离，从细胞质移到细胞核，在此与靶DNA 结合，正调节基因的转录，参与免疫和炎症反应、细胞调节以及凋亡。通过结合CLTM cDNA合成试剂 (该试剂无需RNA制备，直接用细胞裂解液进行反转录)， 美国Signosis公司研发了一种基于微孔板杂交阵列直接检测细胞裂解液中20多种NFkB调节基因表达。 　　A. 优点： 　　细胞裂解液中人NFkB调控的cDNA检测试剂具有以下优点： 　　·操作简单---无需RNA制备，直接用细胞裂解液合成cDNA。此外试验ELISA一样简单。 　　·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 　　·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 　　B. 原理： 　　与常规的需要总RNA进行反转录不同，美国Signosis开发了一种基于CLTM cDNA合成的微孔板阵列试剂。该试剂无需RNA制备，直接用用细胞裂解液通过反转录合成cDNA，然后用合成的cDNA探针进行微孔板阵列的杂交。通过预包被在微孔板上特异的寡核苷酸，靶基因被特异的捕获，捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物，发光程度用微孔板发光检测仪表示为RLUs，基因表达水平直接与发光强度成正比。