直接用细胞裂解物分析人HIF调控的cDNA检测试剂

　　快速生长的肿瘤会出现缺氧区，大部分细胞对缺氧的反应是(1)产生VEGF和其它缺氧诱导的血管生成因子以促进增加血管生成，从而增加组织的氧合(2)从有氧的磷酸化到缺氧的糖酵解的代谢转换。缺氧诱导因子-1(HIF-1)是在缺氧反应过程中有重要作用的一种氧调控转录激动剂。HIF-1a亚单位是氧依赖性泛素化和蛋白酶体降解。细胞因子如白介素-1和肿瘤坏死因子-a刺激HIF-1依赖的基因表达。HIF-1增加促进血流及炎症的数种基因的表达，如血管生成因子(VEGF)。通过结合CL(TM )cDNA合成试剂 (该试剂无需RNA制备，直接用细胞裂解液进行反转录)， 美国Signosis公司研发了一种基于微孔板杂交阵列直接检测细胞裂解液中20多种HIF调节基因表达。 　　A. 优点： 　　细胞裂解液中人HIF调控的cDNA检测试剂具有以下优点： 　　·操作简单---无需RNA制备，直接用细胞裂解液合成cDNA。此外试验ELISA一样简单。 　　·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 　　·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 　　B. 原理： 　　与常规的需要总RNA进行反转录不同，美国Signosis开发了一种基于CL(TM )cDNA合成的微孔板阵列试剂。该试剂无需RNA制备，直接用细胞裂解液通过反转录合成cDNA，然后用合成的cDNA探针进行微孔板阵列的杂交。通过预包被在微孔板上特异的寡核苷酸，靶基因被特异的捕获，捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物，发光程度用微孔板发光检测仪表示为RLUs，基因表达水平直接与发光强度成正比。