干细胞相关的miRNA微孔板阵列试剂

　　在胚胎发育的过程中，干细胞可以分化形成所有的胚胎组织。在成人有机体，干细胞和祖细胞作为身体的修复系统，重新补充专业细胞，以维持再生器官正常转交，例如血液、皮肤或者小肠组织。 最近研究提出干细胞的维护和分化是由microRNAs (miRNA)调控的。miRNA是一段小的非编码RNA分子(大约20个核苷酸长)，对基因的表达调控和细胞分化起着重要的作用。研究发现干细胞的正常维持和分化是受到miRNA严格调控的。在干细胞中，miRNA的表达水平也不一样。例如，在神经线性分化的过程中，脑组织特异性的miR-124a和miR-9的表达差别很大。据报导miRNA也调控癌症干细胞。干细胞miRNA芯片是专门检测干细胞维持和分化相关的47种miRNA表达水平，可以用于人源，小鼠，以及大鼠的样品。对干细胞miRNA表达的研究可以帮助了解干细胞的调控机制。 　　A.优点： 　　美国Signosis干细胞相关的miRNA微孔板阵列试剂是一种直接杂交总RNA的一种方法，具有下列优点： 　　·操作简单---检测48种miRNA的表达如ELISA试验一样简单，无需用酶转换miRNA成cDNA，检测步骤只是孵育和洗涤。 　　·灵敏度高---较miRNA Northern blotting分析敏感100倍。 　　·分辨力强---在分辨同源miRNA 时，较Northern blot有更高的分辨力。 　　·差别定量---二个或更多标本miRNA表达的差异可定量分析。 　　B.原理： 　　美国Signosis的miRNA直接杂微孔板交阵列方法是简单的二步法。板杂交和链霉亲和素-辣根酶检测。微孔板包被上oligo mix，其包括一对oligo—与特定靶miRNA并列杂交的相应oligo、通用捕获oligo和生物素标记oligo。该方法中，总RNA直接用于杂交。当RNA中存在靶miRNA时，其做为桥将生物素标记的oligo与捕获oligo连接起来，这样可以通过链霉亲和素辣根酶结合物以及化学发光底物检测。如果不存在靶miRNA时，生物素标记的探针就被冲洗掉，因此无检测信号。在微孔板阵列中，48个孔包被上不同的oligo mix来检测不同的miRNA，96孔板可定量测定和比较二个样品中48种miRNA，U6用于标化。