凋亡相关的miRNA微孔板阵列试剂

　　凋亡涉及一系列生化活动，这些活动导致特征性的细胞形态和死亡，包括细胞膜的变化、细胞收缩、核碎裂、染色质浓缩、染色体DNA断裂。在发育期和肌体平衡期，把不要的细胞除去是非常重要的。过渡凋亡引起营养不足，如脑缺血损伤;不充分的凋亡导致细胞增殖失控。MicroRNAs (miRNAs)是非编码的小RNA分子，调控30%哺乳动物基因的表达。许多miRNAs对凋亡细胞信号调控有影响，如miR-145、miR-216、miR-182、miR-96 miRNAs的过渡表达导致天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3的活性下降。中帜生物公司开发的miRNA阵列试剂检测凋亡相关的47种miRNAs。检测这些miRNAs的表达有助于揭示凋亡的miRNAs调控机制。 　　A.优点： 　　中帜生物凋亡相关的miRNA微孔板阵列试剂是一种直接杂交总RNA的一种方法，具有下列优点： 　　·操作简单——检测48种miRNA的表达如ELISA试验一样简单，无需用酶转换miRNA成cDNA，检测步骤只是孵育和洗涤 　　·灵敏度高——较miRNA Northern blotting分析敏感100倍 　　·分辨力强——在分辨同源miRNA 时，较Northern blot有更高的分辨力 　　·差别定量——二个或更多标本miRNA表达的差异可定量分析 　　B.原理： 　　中帜生物的miRNA直接杂微孔板交阵列方法是简单的二步法。板杂交和链霉亲和素-辣根酶检测。微孔板包被上oligo mix，其包括一对oligo—与特定靶miRNA并列杂交的相应oligo、通用捕获oligo和生物素标记oligo。该方法中，总RNA直接用于杂交。当RNA中存在靶miRNA时，其做为桥将生物素标记的oligo与捕获oligo连接起来，这样可以通过链霉亲和素辣根酶结合物以及化学发光底物检测。如果不存在靶miRNA时，生物素标记的探针就被冲洗掉，因此无检测信号。在微孔板阵列中，48个孔包被上不同的oligo mix来检测不同的miRNA，96孔板可定量测定和比较二个样品中48种miRNA，U6用于标化。