miRNA直接杂交微孔板阵列试剂

　　miRNA已知参与了许多生物活动，其异常表达与人类疾病相关。许多方法如芯片或微珠的方法常用于同时检测多种miRNA的表达，不过这些方法在分析时需要把miRNA转换成cDNA探针。中帜生物研发出一种简单的miRNA直接杂交微孔板阵列方法，该方法中用于杂交的总RNA无需预处理，方法简单只是杂交和检测，重要的是用此简单方法可同时分析比较48种miRNA。 　　A.优点： 　　中帜生物基于其自有专利技术的miRNA直接杂交微孔板阵列方法具有下列优点： 　　·操作简单——检测48种miRNA的表达如ELISA试验一样简单，无需用酶转换miRNA成cDNA，检测步骤只是孵育和洗涤 　　·灵敏度高——较miRNA Northern blotting分析敏感100倍 　　·分辨力强——在分辨同源miRNA 时，较Northern blot有更高的分辨力 　　·差别定量——二个或更多标本miRNA表达的差异可定量分析 　　B.原理： 　　中帜生物的miRNA直接杂微孔板交阵列方法是简单的二步法。板杂交和链霉亲和素-辣根酶检测。微孔板包被上oligo mix，其包括一对oligo—与特定靶miRNA并列杂交的相应oligo、通用捕获oligo和生物素标记oligo。该方法中，总RNA直接用于杂交。当RNA中存在靶miRNA时，其做为桥将生物素标记的oligo与捕获oligo连接起来，这样可以通过链霉亲和素辣根酶结合物以及化学发光底物检测。如果不存在靶miRNA时，生物素标记的探针就被冲洗掉，因此无检测信号。在微孔板阵列中，48个孔包被上不同的oligo mix来检测不同的miRNA，96孔板可定量测定和比较二个样品中48种miRNA，U6用于标化。