miRNAs是非编码的小RNA分子,调控着30%哺乳动物基因的表达,其中一些分子是干细胞特异的。miRNA表达的芯片分析方法显示干细胞上存在一组独特的miRNAs。美国Signosis公司开发了一系列miRNA微孔板检测试剂来分析这些分子。
A.优点:
美国Signosis基于其自有专利技术的miRNA微孔板检测试剂具有下列优点:
·操作简单---做miRNA试验象做ELISA试验,无需用酶转换miRNA成cDNA,检测步骤只是孵育和洗涤。
·灵敏度高---较miRNA Northern blotting分析敏感100倍。
·分辨力强---在分辨同源miRNA 时,较Northern blot有更高的分辨力。
·差别定量---二个或二个以上特定miRNA表达的差异可定量分析。
B.原理:
基于自有专利miRNA微孔板检测中,一个miRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接,一个连接oligo与捕获oligo和待测的miRNA部分杂交,另一个连接oligo与检测oligo和待测的miRNA另一部分杂交,杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固者在微孔板上,再由辣根酶标记链酶亲和素和发光底物检测,这种杂交体结构对miRNA分子序列非常敏感,一个核苷酸的差异即会阻止杂交体的形成,从而可分辨同源miRNA,而Northern blot则很难鉴别同源miRNA,此外该方法的敏感性较Northern blot高。