肿瘤miRNA微孔板检测试剂I

　　miRNAs参与调解各种生物过程，如细胞死亡和细胞增殖。miRNA可以做为原癌基因和肿瘤抑制基因，在肿瘤形成中起着重要作用。miRNAs表达水平的变化是与其相应的蛋白编码的靶基因功能不正常有关，其中许多参与癌症的发生和发展。例如，BCL2原癌基因是miR-15a和miR-16的靶向基因，PTEN肿瘤抑制物是miR-21、HOXD10是miR-10b、Pak是miR-7、MYOD1和ER是miR-206、Her2是miR-125a的靶向基因。美国Signosis研发的肿瘤miRNA微孔板检测试剂I是定量检测7种有名的癌相关miRNAs的表达，分别是miR-15a、miR-16、miR-21、miR-21、miR-10b、miR-7、miR-125a和miR-206。RNU48用于试剂盒的标准化。 　　A.优点： 　　美国Signosis基于其自有专利技术的miRNA微孔板检测试剂具有下列优点： 　　·操作简单---做miRNA试验象做ELISA试验，无需用酶转换miRNA成cDNA，检测步骤只是孵育和洗涤。 　　·灵敏度高---较miRNA Northern blotting分析敏感100倍。 　　·分辨力强---在分辨同源miRNA 时，较Northern blot有更高的分辨力。 　　·差别定量---二个或二个以上样本的miRNA簇表达的差异可定量分析。 　　B.原理： 　　基于自有专利miRNA微孔板检测中，一个miRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接，一个连接oligo与捕获oligo和待测的miRNA部分杂交，另一个连接oligo与检测oligo和待测的miRNA另一部分杂交，杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固者在微孔板上，再由辣根酶标记链酶亲和素和发光底物检测，这种杂交体结构对miRNA分子序列非常敏感，一个核苷酸的差异即会阻止杂交体的形成，从而可分辨同源miRNA，而Northern blot则很难鉴别同源miRNA，此外该方法的敏感性较Northern blot高。捕获的miRNAs进一步用辣根酶标记的亲和素检测，发光信号的强度用发光仪检测，miRNAs表达水平直接与发光度值成正比。