miRNA微孔板检测试剂

　　miRNA是小的非编码RNAs，通过选择性的与互补的mRNA序列结合控制着转录水平的基因表达。近30%哺乳动物基因受小RNA分子的调控，从而调节各种生物功能，包括发育、细胞分化、增殖、凋亡、维持stemness和impriting。Northern blot是分析各种miRNAs常用的方法，尽管最近出现了一些新的方法，如实时定量PCR和定量测定miRNAs的侵入者探针法，但Northern blot分析的灵敏度低、通量差仍是其主要不足，实时定量PCR和侵入者探针法需要cDNA转换。美国Signosis基于其自有的专利技术-miRNA微孔板检测无需将miRNA分子转换成cDNAs，检测步骤主要是孵育和洗涤，非常简单。 　　miR-133和miR-1在心脏和骨骼肌中优势表达。在心脏细胞的分化、增殖和凋亡中发挥重要作用。二者聚集在相同的染色体位点，在发育过程中，以一种组织特异的方式共同转录，但在肌肉增殖、分化和凋亡中有不同的功能。许多重要的靶已得以认识和明确，如成肌纤维母细胞增殖中miR-133的靶是血清反应因子(SRF)，mygenesis中miR-1的靶是histone deacetylase (HDAC4)，miR-133的靶是caspase-9，心肌细胞凋亡中miR-1的靶HSP60和HSP70，细胞外基质蛋白增加(纤维变性)中miR-133和miR-1的靶是结缔组织生长因子(CTGF)，更为重要的是miRNA表达的异常调节与病人患病的心脏相关联，因此具有做为心血管病诊断标记物和治疗靶点的巨大潜力。下图2所示miR-133和miR-1是Signosis的miRNA微孔板检测试剂分析检测结果。 　　A.优点： 　　美国Signosis基于其自有专利技术的miRNA微孔板检测试剂具有下列优点： 　　·操作简单---做miRNA试验象做ELISA试验，无需用酶转换miRNA成cDNA，检测步骤只是孵育和洗涤。 　　·灵敏度高---较miRNA Northern blotting分析敏感100倍。 　　·分辨力强---在分辨同源miRNA 时，较Northern blot有更高的分辨力。 　　·差别定量---二个或二个以上特定miRNA表达的差异可定量分析。 　　B.原理： 　　基于自有专利miRNA微孔板检测中，一个miRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接，一个连接oligo与捕获oligo和待测的miRNA部分杂交，另一个连接oligo与检测oligo和待测的miRNA另一部分杂交，杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固者在微孔板上，再由辣根酶标记链酶亲和素和发光底物检测，这种杂交体结构对miRNA分子序列非常敏感，一个核苷酸的差异即会阻止杂交体的形成，从而可分辨同源miRNA，而Northern blot则很难鉴别同源miRNA，此外该方法的敏感性较Northern blot高。