哺乳动物miRNAs在组织中的丰度变化很大,例如,miR-133在骨骼肌中表达很高,在心脏中等 ,其它组织未检测到。要检测低表达的miRNA需要高灵敏的方法。美国Signosis高敏miRNA Northern Blot 试剂较常规基于生物素的化学发光检测的敏感10-100倍。
A.优点:
高敏miRNA Northern Blot 试剂具有下列优点:
·灵敏度高---较常规基于单生物素检测灵敏10-100倍。
·步骤简单---用总RNA点样杂交,HRP检测。
·无同位素---基于化学发光检测。
·探针预制---用生物素预标记和多生物素放大探针。
B.原理:
RNA样品经过凝胶电泳分离、转移至膜上。特定的miRNA的表达通过生物素标记探针---与miRNA互补的序列和标示序列进行检测,标示序列通过多生物素放大试剂检测。