受体酪氨酸激酶(RTKs)在把信号从细胞外转至细胞内的过程中发挥重要作用。人类基因组上共计有58种RTKs。RTKs与某种生长因子、细胞因子或激素结合后被激活,导致自身的磷酸化。酪氨酸自身的磷酸化产生含有SH2信号蛋白传递的补充位点。与含有不同SH2结构域信号蛋白的结合代表了不同信号通路的激活。因此信号通路的激活通过检测SH2结构域的结合来评价。比较二个样本的SH2结构域结合可以促进发现信号通路的差异。
A. 优点:
· 多种复合--- 一次试验可测定RTK与46种SH2结构域的相互作用
· 差别定量--- 在与SH2结构域相互作用的各个蛋白的差别,可以定量比较。
· 操作简单--- 步骤简单如同ELISA
B. 原理
基于SH2结构域的RTK检测试剂是一种类似ELISA方法的检测。SH2结构域被固相化在微孔板上。生物素化标记的phosphotyrosine抗体以及亲和素辣根酶结合物检测。46个孔包被了46种不同的SH2结构域,因此可检测46种的结合。96孔板可以检测2份样品。待测样本可同时与结构域和抗体结合。孵育后,洗涤板孔除去未结合的抗体。 加入HRP底物TMB,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。450 nm处测定吸光值。