特应性皮炎（AD）模型

l 小鼠体重

l 背部及耳部表皮厚度测量

l 血清中总IgE检测

l 病理分析：皮肤炎症等病变，嗜酸性粒细胞等

在野生型C57BL/6小鼠中通过OXA诱导的AD模型。（A） 小鼠体重；（B） 耳部厚度；（C） 血清总IgE浓度。实验结果显示OXA诱导组的耳部厚度和血清IgE显著增加。数值以平均值±标准误表示。

在野生型C57BL/6小鼠中诱导的 AD模型的耳部皮肤病理学和淋巴细胞浸润分析。（A）小鼠耳组织切片的苏木精-伊红（H&E）染色；（B）耳表皮嗜酸性粒细胞浸润评分。数值以平均值±标准误表示。

可以选择在免疫接种时开始治疗-预防性策略，也可以在小鼠发病后开始治疗-治疗性策略。

1）从B图可以看出，OXA造模组的耳部厚度有明显的增加，同时血清中总的IgE（图C）有明显的升高，证明造模成功。

2）从耳部厚度和IgE变化情况可以看出，不同浓度的Dexamethasone对AD疾病具有不同程度的缓解作用。

3）高剂量组（0.09% Dexamethasone）对耳部皮肤水肿的缓解作用达到了与对照组持平的效果。但与对照组相比，也会导致明显的体重减轻。

4）小鼠耳组织切片苏木精-伊红(H&E)染色(图D)；耳表皮嗜酸性粒细胞浸润评分(图E)。

数值以平均值±标准误表示。

❉ 病理分析

组别设置

从病理统计结果发现，除对照组外，其余四组动物背部和耳部皮肤表皮均可见不同程度的基质细胞增生、表皮增厚、角化过度伴角化不全、表皮痂皮、真皮及皮下组织可见混合炎症细胞浸润等特应性皮炎相关的病理性改变，表明G2造模组和G3-G5给药组的模型动物均造模成功。对各组动物的背部皮肤和耳部皮肤嗜酸性粒细胞浸润变化进行了病理学评分和统计，给药组G3-G5背部和耳部皮肤嗜酸粒细胞浸润均低于G2造模组。其中，背部皮肤中，给药组G3-G5嗜酸粒细胞浸润程度未见显著差异。耳部皮肤中，给药组G4、G5组嗜酸粒细胞浸润程度要低于G2和G3组。上述结果表明三组浓度的受试品均对特应性皮炎相关症状有一定改善作用，其中浓度为0.06%和0.09%的Dexamethasone药效较好。

Dupilumab减轻OXA诱导的B-hIL4/IL4RA小鼠特应性皮炎。第0天在小鼠的耳部和皮肤上注射0.8%的OXA，然后从第7天到第25天，每周3次注射0.4%的OXA，记录小鼠体重和耳部厚度。小鼠从第6天起每周2次接受PBS或Dupilumab(10，25 mg/kg)治疗，共6次。最后收集耳部、背部皮肤和血液(图A)。Dupilumab对体重没有影响(图C)。Dupilumab给药组小鼠的耳部厚度(图B)和血清IgE (图D)降低。

Dupilumab (内部合成)能剂量依赖性治疗OXA诱导的B-hIL4/IL4RA小鼠皮肤损伤。

用ELISA法分析OXA诱导的B-hIL4/hIL4RA小鼠AD模型中的蛋白表达。分别于第9、16、23、26天采集建模区耳部和皮肤样本，进行ELISA分析。Dupilumab可以减轻OXA诱导的B-hIL4/hIL4RA小鼠中人IL-4的升高。

用Luminex分析OXA诱导的B-hIL4/hIL4RA小鼠AD模型中的蛋白表达。分别于第9、16、23、26天采集建模区耳部和皮肤样本，采用Luminex进行分析。

用MSD分析OXA诱导的B-hIL4/hIL4RA小鼠AD模型的蛋白表达。分别于第9、16、23、26天采集建模区耳部和皮肤样本，采用MSD进行分析。

用qRT-PCR分析小鼠IL-5和IL-13在OXA诱导的B-hIL4/hIL4RA小鼠AD模型中的表达。分别于第9天和第26天采集耳部样本，提取总RNA。然后逆转录RNA样本，用qRT-PCR检测小鼠IL-5、IL-13水平，用小鼠GAPDH作为管家基因。

表1 细胞因子分析汇总