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百奥赛图成立于2009年,总部位于北京, 在江苏海门和美国波士顿设有全资子公司。经过10年发展,百奥赛图成为集模式动物定制化服务,重要模式动物产品开发、规模化繁殖与供应、体内药理药效评价服务、抗体药物研发外包服务为一体的高科技生物医药企业。结合抗体药物CMC/CDMO及IND申报业务(建设中),全力打造符合国际新药研发市场与合作伙伴要求的、高质量的抗体药物研发一站式服务平台。百奥赛图将与合作伙伴一起,助力全球药企加快药物研发,满足患者的医疗需求,为更好的人类健康而努力。

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RenMab小鼠背景介绍治疗性抗体药物具有特异性高、性质均一、可针对特定靶点定向开发等优点,在各种疾病治疗、特别是对肿瘤治疗的应用前景备受关注。小鼠因其对人类抗原的低免疫耐受性以及操作简易性被作为最常用的抗体药物开发工具。但是鼠源抗体引起的人体的排斥反应非常严重地影响抗体治疗的安全性和疗效。因此,科学有效的将鼠源抗体人源化在抗体药物开发的过程中至关重要。抗体人源化小鼠模型的问世为抗体药物开发带来了巨大的变革。敲除小鼠内源抗体基因(重链和轻链)的同时引入人源抗体基因的抗体人源化小鼠可以实现一步开发人源化抗体。通过体内筛选极大简化抗体开发流程;降低开发成本和风险提高成功率;同时显著提升抗体药物临床应用的安全性及治疗效果。RenMab小鼠是目前世界上抗体基因替换最完整的抗体人源化小鼠。采用独有的染色体工程技术将小鼠内源性抗体基因H链κ链可变区基因原位替换为人源抗体基因,保留完整的鼠源的恒定区以及重要调控元件,同时敲除鼠源λ链基因。RenMab小鼠的人源化抗体基因替换长度和完整性显著优于其他已有模型。与正常小鼠相比,RenMab小鼠的免疫系统发育并无异常。由于其具有更为丰富的抗体基因多样性,RenMab小鼠在抗体药物开发过程中具有更高的潜力。可以得到更多的强特异性,高亲和性,丰富多样性的抗体药物。RenMab小鼠的特点和优势展示1. 原位替换的改造方式确保RenMab小鼠的抗体基因模式与人体内高度一致RenMab小鼠的设计和开发是基于百奥赛图独特的染色体工程技术,对野生型小鼠H链和κ轻链的抗体基因可变区分别进行人源化替换。H链:使用长度约为1Mb的人源抗体基因可变区序列(包含所有的人源V/D/J抗体基因)替换相应鼠源长约2.6Mb的抗体基因可变区序列。κ轻链:人κ轻链可变区包含方向相反的两个拷贝,其中proximal V cluster功能区完整,是其他抗体人源化小鼠模型的所选择的主要人源化改造区域;distal V cluster虽然因为缺乏C基因而被认为是假基因,但是其中的V,J基因仍然具有潜在的功能性。我们使用包含上述两个方向相反拷贝(长度约为1.6Mb)的人源抗体基因可变区序列替换相应鼠源长约为3.2Mb的抗体基因可变区序列。同时对鼠源λ链进行全基因敲除。  Figure1 RenMab改造示意图 2. 精准的改造确保RenMab小鼠具有与野生型小鼠同样完备的免疫发育系统对RenMab小鼠的多个器官和组织进行免疫系统发育的全面检测,分析表明RenMab小鼠与野生型小鼠相比,在所有检测项目中均具有高度的一致性。RenMab小鼠与野生型小鼠的脾脏重量无显著性差异,且免疫器官发育正常。B细胞、T细胞、NK细胞等多个免疫细胞的数量,以及分化和成熟模式与野生型小鼠也高度相似。  Figure2. 脾脏和淋巴结免疫细胞分布3. 抗体基因表达高度多样性极大提高抗体药物开发的丰富程度RenMab小鼠具有人抗体H链κ轻链可变区基因全长序列信息,与市场已有抗体人源化小鼠模型相比,可以表达更加多样性的抗体分子。同时RenMab小鼠血清中不同抗体亚型检测与野生型小鼠基本无差异。RenMab小鼠的抗体基因可变区利用广泛,VDJ重排多样。利用其可以获得更多的治疗性抗体,助力抗体药物开发。    Figure3 血清中抗体亚型检测RenMab小鼠相关检测数据1.人源抗体基因可变区高度完整在DNA水平上,采用PCR-测序等技术对RenMab小鼠抗体基因进行了全面的检测。数据表明RenMab小鼠具有非常完整的人抗体基因序列。2.免疫系统发育正常经全面检测,RenMab小鼠免疫脏器发育与野生型小鼠没有显著差异。B细胞,T细胞,NK细胞,DC细胞等多种免疫细胞在细胞数量、细胞分化和成熟模式方面与野生型小鼠也高度相似。3.抗体基因表达多样采用一代,二代测序进行抗体基因表达水平的检测。检测结果表明,B细胞中表达的抗体基因在H链V/D/J区和κ链V/J区的利用具有高度多样性。同时RenMab的不同V/D/J区利用率与人体V/D/J区利用率在趋势上有相似性。4.VDJ重排具有多样性同时测序数据分析表明,B细胞中表达的抗体基因在V/D/J区之间可以进行正确的重排,并且在重排的组合方面具有丰富的多样性。5.重链CDR3长度多样性通过对RenMab小鼠抗体基因重链的CDR3区序列统计分析,数据表明CDR3区具有明显的长度多态性,长度分布在6-27个氨基酸残基之间,其中长度在13-18氨基酸残基之间分布密度最高。6.CDR3氨基酸组成与人体利用率高度相近在重链抗体基因CDR3氨基酸残基利用率分布模式方面,RenMab小鼠与人体具有较高的相似性。7.高频的体细胞超突变经过测序比对发现,RenMab小鼠抗体基因可以产生高频率体细胞超突变。其中体细胞超突变的突变数量和突变位置等方面也表现正常。8.对抗原的免疫应答正常采用多种抗原去免疫刺激RenMab小鼠,与非免疫刺激组相比, 免疫组RenMab小鼠血清的IgG和IgM水平有显著的提高,提示RenMab小鼠的免疫应答水平正常。9.抗体基因亚型转换正常通过ELISA对RenMab小鼠体内的抗体亚型检测,IgA,IGM,IgG1,IgG2,IgG3均有检测到,且各种亚型的具体含量与野生型小鼠体内含量一致。10.超强的抗体特异性和亲和力RenMab小鼠平台筛选到的人源化抗体对抗原具有很强的特异性。在亲和力方面,结合能力可以达到nmol-pmol水平。在开发强特异性和高亲和力的治疗性抗体药物方面具有很大的潜力。

伴随着日益升高的温度,整座城市都沉浸在粉红色的泡泡里,空气中弥漫着恋爱的气息,大家最近的巧克力还吃的完吗?吃不完小编可以帮忙呦。言归正传,在这甜蜜的五月下旬,我们的产品速递又来啦。众所周知,免疫细胞的活化和抑制需要不同的细胞外信号共同刺激,根据协同刺激分子的功能可将其分为共刺激分子和共抑制分子两类。前者产生正性信号,促进淋巴细胞增殖、分化以及细胞因子的分泌;后者产生负性信号,削弱、限制或终止淋巴细胞免疫应答。因此,正负信号的强弱变化可以调控免疫的强度和方向,如在抗病毒和肿瘤中提高免疫应答,而在免疫排斥和自身免疫性疾病中降低免疫应答[1]。图1、T细胞表面主要刺激性及抑制性受体[2]BTLA(B and T lymphocyte associated)是B细胞和T细胞衰减蛋白,是另一种Ig超家族的检查点负调分子,在结构上和CTLA-4及PD-1类似,不仅表达于B细胞、T细胞、NK细胞,在树突状细胞和巨噬细胞中也有表达。BTLA与其配体HVEM结合(HVEM是肿瘤坏死因子受体超家族成员)结合传递共抑制信号,在机体抗肿瘤免疫应答中发挥负性调节作用,并与肿瘤的免疫逃逸机制相关。BTLA抑制剂可以增强TCR信号通路,并恢复T细胞功能,成为肿瘤生物治疗潜在的新靶点。百奥赛图的B-hBTLA 小鼠可以检测BTLA相关的人源化抗体药效,助力药物的临床前研究。B-hBTLA蛋白表达分析图2、B-hBTLA人源化小鼠脾细胞活化及流式检测结果显示:在C57BL/6小鼠的B细胞中可检测到mBTLA+细胞。在B-hBTLA纯合鼠的B细胞中,可检测到hBTLA+细胞。抗人BTLA抗体药效验证图3、利用B-hBTLA小鼠进行抗人BTLA抗体药效验证实验将改造过的小鼠结肠癌MC38细胞(人源化HVEM并去除小鼠HVEM)移植到B-hBTLA纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=6)。结果显示:相同剂量下,不同抗人BTLA抗体展现对肿瘤的抑制效果不同;同一抗人BTLA抗体,不同剂量下也展现出不同抑瘤效果。A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。 结果证明: B-hBTLA小鼠是评估人BTLA抗体体内药效的有力工具。今年3月君实生物开发出全球首个(First in human, FIH)特异性针对B-和T-淋巴细胞衰减因子(BTLA)的重组人源化IgG4κ单克隆抗体(TAB004,或JS004)。其新药临床试验申请(IND)已于3月22日获得美国食品药品监督管理局(FDA)受理,拟适用于晚期不可切除或转移性实体瘤(包括淋巴瘤)的治疗。体外和体内研究表明,JS004可以促进肿瘤特异性T淋巴细胞增殖和提高淋巴细胞功能,在BTLA人源化小鼠的肿瘤模型里减轻肿瘤负荷并提高存活率。据悉,君实生物计划在PD-1抗体耐药的实体瘤病人里展开JS004的1期爬坡试验,并在1期扩展组进行与特瑞普利单抗的联合治疗的尝试。这款新药给肿瘤患者带来了新的治疗选择,BTLA在肿瘤免疫研究中十分具有潜力,希望BTLA未来可以在肿瘤治疗中发挥更大的作用。综上所述,B-hBTLA是一种理想的评估人BTLA抗体体内药效的人源化小鼠模型。百奥赛图拥有多种人源化小鼠模型,并提供模型构建和药效服务。想了解更多小鼠模型及相关服务,请联系我们哦~参考文献[1]刘艳平,BTLA信号在T细胞活化启动和早期阶段的调节作用[J].江苏:苏州大学,2012[2]http://pic.sogou.com/d?query=T%CF%B8%B0%FB% BB%EE%BB%AF%D3%EB%D2%D6%D6%C6&mode=1&did=155#did154

自身免疫性疾病指由于自身免疫系统功能紊乱而引起机体攻击自身器官、细胞和组织的疾病,常见于类风湿性关节炎、多发性硬化症、银屑病等。目前,因其具体生物学发病机制不明确,尚不能被彻底治愈,只能通过治疗缓解症状和控制疾病进展。   可喜的是,近年有研究发现, Th17 细胞通过分泌炎症细胞因子 IL17A, 广泛参与多种自身免疫性疾病的发生、发展。通过抑制 Th17 细胞的分化或使用抗IL17的抗体能够改善自身免疫性疾病[1]。  Reciprocal relationship between regulatory T (T-reg) cells and Th17 cells[2].   今天呢,小编要为大家介绍的,便是我们专为自身免疫而改造的B-hIL17A mice以及基于该小鼠构建的自身免疫疾病新模型-EAE & 银屑病。 B-hIL17A mice 1. 基本信息  2. 蛋白质表达分析 ELISA分析C57BL/6和纯合B-hIL17A小鼠血清中IL17A蛋白含量。结果显示:C57BL/6小鼠中可检测到小鼠IL17A,在纯合B-hIL17A小鼠中可检测到人IL17A。 3.B-hIL17A小鼠白细胞亚群分析(脾脏)    流式细胞术分析C57BL/6和B-hIL17A小鼠脾脏白细胞亚群。 结果显示:纯合B-hIL17A小鼠中白细胞亚群与C57BL/6小鼠相似,表明T/B,NK,单核细胞,DC和巨噬细胞的发育不受IL17A人源化改造的影响。 4.B-hIL17A小鼠T细胞亚群分析(脾脏) 流式细胞术分析C57BL/6和B-hIL17A小鼠脾脏T细胞亚群。 结果显示:纯合B-hIL17A小鼠中的T细胞亚群与C57BL/6小鼠中相似,表明T细胞发育不受IL17A人源化改造的影响。 小结综合以上模型验证实验,表明B-hIL17A小鼠人源化改造成功,免疫系统发育情况与野生型相比基本无异,因此,可利用该小鼠进一步构建自身免疫疾病模型。MS/EAE模型   多发性硬化(multiple sclerosis, MS)是一种免疫介导的中枢神经系统炎性脱髓鞘性疾病,由自身反应性Th细胞驱动。目前,Th17淋巴细胞在MS发病机制研究已取得了重大进展(如:Th17细胞不同亚群不同程度的致病性,以及分泌效应细胞因子的作用等),经批准的MS疗法也为患者带来了明显益处, 但临床用药需求尚未完全解决。  实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是一种诱导的脱髓鞘疾病模型,其主要症状与人MS非常相似。   百奥赛图基于B-hIL17A mice构建了理想的EAE小鼠模型,可用于相关药物临床前筛选实验,模型数据如下所示: 1.EAE模型构建流程 2. EAE模型小鼠临床评分   在10周龄B-hIL17A小鼠中通过MOG35-55/CFA乳剂PTX诱导EAE(F, n = 5)。MOG:髓鞘少突胶质细胞糖蛋白; PTX:百日咳毒素。 3.EAE模型小鼠H&E及IHC染色  EAE期间小鼠中枢神经系统(CNS) 的局部炎症(F,n = 5)。在MOG/CFA和PTX免疫后第45天,取脊髓,进行腰椎切片H&E和IHC染色。结果显示:MOG组炎症细胞浸润明显增加,髓鞘蛋白明显减少。 4. EAE模型小鼠淋巴结IL17A+细胞检测 流式分析B-hIL17A小鼠淋巴结内IL-17及IFNγ蛋白表达情况(对照组 & MOG诱导组)。结果显示:MOG诱导后, B-hIL17A小鼠淋巴结中hIL-17及mIFNγ蛋白表达增加。(A)蛋白表达分析;(B)细胞数目分析。 5. EAE模型小鼠中枢神经系统(CNS)IL17A+细胞检测 流式分析B-hIL17A小鼠CNS内IL-17及IFNγ蛋白表达情况(对照组 & MOG诱导组)。结果显示:MOG诱导后,B-hIL17A小鼠CNS中hIL-17及mIFNγ蛋白表达增加。(A)蛋白表达分析;(B)细胞数目分析   6. hIL17A抗体疗效评估小鼠发病后进行hIL17A抗体治疗,检测临床评分和体重变化情况。 结果显示:hIL17A抗体处理后,临床评分水平远低于未给药对照组。 银屑病模型    银屑病,俗称“牛皮癣”,是一种慢性、复发性疾病,全球发病率约在2%-3%,其分子机理研究表明患者体内免疫细胞过度释放促炎症因子(如IL17等),先天及获得性免疫系统长期处于激活状态,从而引发多组织及器官的持续性损伤,其中角质形成细胞、树突状细胞和T细胞扮演了重要角色。  银屑病目前尚无法完全治愈,只能通过药膏,光疗,免疫抑制剂等疗法控制症状,百奥赛图基于B-hIL17A mice构建了理想的银屑病小鼠模型,以期助力更多、更有效的的药物临床前研发。 1.银屑病模型构建流程 IMQ(伊米喹莫特乳膏)局部涂抹于左耳和背部,QD x 15 2.银屑病模型小鼠表征及临床评分                                                                                                                                             Control,Day 7                   IMQ, Day 7        对照组及IMQ诱导组小鼠表征(上图)及临床评分(下图)。结果表明:IMQ显著增加皮肤炎症的临床表征。2.银屑病模型小鼠H&E染色及表皮厚度将对照组及IMQ诱导组小鼠耳部及背部皮肤进行H&E染色(上图)及厚度测量(下图)。结果显示:IMQ可显著增加耳部和背部皮肤的表皮厚度。更多模型小鼠,尽在百奥赛图,欢迎您的垂询! 参考文献:[1] doi:10. 3969 / j. issn. 1000-484X. 2018. 07. 026[2] Oukka, M. (2008). Th17 cells in immunity and autoimmunity. Annals of the Rheumatic Diseases, 67(Suppl 3), iii26 iii29.doi:10.1136/ard.2008.098004

抗人PD-1/PD-L1抗体药效实验肿瘤免疫疗法是当前肿瘤治疗领域中最具前景的研究方向之一,《Science》杂志将肿瘤免疫疗法评为2013年十大科学突破第一位。目前,针对PD-1/PD-L1通路抑制剂的研究受到了特别的关注。百奥赛图公司开发的B-hPD-1人源化小鼠,不仅可以用于PD-1/PD-L1信号机理研究,还可用于PD-1/PD-L1抗体的毒理研究和筛选开发,为在小鼠体内进行药物筛选和测试提供了有力工具,大大加快了抗体药物的开发进程、减少了临床前测试的时间成本,降低了药物开发的风险。 B-hPD-1 小鼠:PD-1和PD-L1抑制剂研发的有力模型C57BL/6遗传背景:目前公认的肿瘤学、生理学、免疫学、遗传学研究中常用的品系,为近交系小鼠,具有实验结果精度高,可比性好,应激反映均一等特点。Pd-1基因人源化:将包括Igv在内的部分序列进行人源化,充分保留了PD-1抗体等PD-1抑制剂的主要结合部位。抗人PD-1抗体在B-hPD-1 mice小鼠和C57BL/6小鼠上药效验证比较图1. 将小鼠结肠癌细胞MC38分别植入B-hPD-1小鼠和C57小鼠体内,并利用人PD-1抗体Ab-X2进行抗肿瘤药效实验。Ab-X2在B-hPD-1小鼠中表现出明显的抗肿瘤效应,而C57小鼠上没有。结果表明, B-hPD-1小鼠对人PD-1抗体表现出了明显的特异性,是人PD-1药效分析和验证实验的有力工具。抗人PD-L1抗体(Tecentriq)在B-hPD-1 mice小鼠和C57BL/6小鼠上药效验证比较图2.抗人PD-L1抗体(Tecentriq)在B-hPD-1 小鼠和C57BL/6小鼠上药效验证比较将改造过的小鼠结肠癌MC38细胞(人源化PD-L1并去除小鼠PD-L1)分别植入B-hPD-1小鼠(n=8)和C57BL/6(n=6)小鼠体内,并利用人PD-1抗体Tecentriq 进行抗肿瘤药效实验。Tecentriq在两种小鼠模型中均表现出明显的抗肿瘤效应。 PD-1(Keytruda)抗体不同剂量在MC38结肠癌上药效验证图3.将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hPD-1纯合小鼠皮下,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=5)。高中低不同剂量抗人PD-1抗体Keytruda给药对肿瘤生长有明显的抑制作用。其中10mg/kg剂量组对肿瘤抑制效果最佳,PD-1抗体体内药效的有力工具。其次为3mg/kg剂量组和1mg/kg剂量组。证明B-hPD-1小鼠是评估人A.肿瘤平均体积±SEM,B.小鼠平均体重±SEM。PD-1(Keytruda)抗体在淋巴瘤EL-4模型上药效验证图4.将小鼠淋巴瘤细胞EL-4移植到B-hPD-1纯合小鼠皮下,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=5)。抗人PD-1抗体Keytruda不同剂量对肿瘤生长均有抑制作用, 证明B-hPD-1小鼠是评估人PD-1抗体体内药效的有力工具。A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。PD-L1(Tecentriq)抗体在结肠癌MC38模型上药效验证图5.将改造过的小鼠结肠癌MC38细胞(人源化PD-L1并去除小鼠PD-L1)移植到B-hPD-1纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约100mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=7)。抗人PD-L1抗体Tecentriq对肿瘤生长有明显的抑制作用,证明B-hPD-1小鼠也是评估人PD-L1抗体体内药效的有力工具。A.肿瘤平均体积±SEM,B.小鼠平均体重±SEM。PD-1(Keytruda)、 PD-L1(Tecentriq)抗体与化疗药物联用数据PD-1(Keytruda)抗体与化疗药物联用体内药效图6.将小鼠结肠癌MC38细胞移植到B-hPD-1纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物分组(n=8)。结果显示:抗人PD-1抗体Keytruda和化疗药物Cisplatin联合用药组与单独用药组相比表现出更为明显的肿瘤抑制效果,证明B-hPD-1小鼠是评估人PD-1抗体与化药联合用药体内药效的有力工具。 A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。PD-L1(Tecentriq)抗体与化疗药物联用体内药效图7.将改造过的小鼠结肠癌MC38细胞(人源化PD-L1并去除小鼠PD-L1)移植到B-hPD-1纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约100mm3时将动物分组(n=7)。结果显示:抗人PD-L1抗体Tecentriq和化疗药物Cisplatin联合用药组与单独用药组相比表现出更为明显的肿瘤抑制效果,证明B-hPD-1小鼠也是评估人PD-L1抗体与化药联合用药体内药效的有力工具。A. 肿瘤平均体积±SEM,B.小鼠平均体重±SEM。利用B-hPD-1/hPD-L1人小鼠进行抗人PD-L1抗体药效验证图8.利用B-hPD-1/hPD-L1小鼠进行抗人PD-L1抗体药效验证实验将改造过的小鼠结肠癌MC38细胞(人源化PD-L1并去除小鼠PD-L1)移植到B-hPD-1/hPD-L1纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=5)。结果显示:抗人PD-L1抗体Tecentriq不同剂量组对肿瘤生长有不同抑制作用。A.肿瘤平均体积±SEM,B.小鼠平均体重±SEM。结果证明:B-hPD-1/hPD-L1小鼠是评估人PD-L1抗体体内药效的有力工具。利用B-hPD-1/hPD-L1人小鼠进行抗人PD-1、PD-L1抗体联用药效验证图9.利用B-hPD-1/hPD-L1人小鼠进行抗人PD-1、PD-L1抗体药效验证实验将改造过的小鼠结肠癌MC38细胞(人源化PD-L1并去除小鼠PD-L1)移植到B-hPD-1/hPD-L1人纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=6)。结果显示:抗人抗体Keytruda、Tecentriq联用与Keytruda组对肿瘤生长有明显的抑制作用。A.肿瘤平均体积±SEM,B.小鼠平均体重±SEM。结果证明:B-hPD-1/hPD-L1小鼠是评估人PD-1、PD-L1抗体体内药效的有力工具。

背景介绍IL4 (interleukin 4)该基因编码的蛋白质是由活化的T细胞产生的多效细胞因子。 IL4能够结合其受体IL4Ra,对B细胞,T细胞,肥大细胞,巨噬细胞等具有免疫调节作用。IL4在哮喘模型中能够诱导B细胞合成大量IgE,招募嗜酸性粒细胞募集,增强ASM收缩,促进气道重塑等过程。[1]IL4Ra(interleukin 4 receptor)该基因编码IL4受体的α链,属于I型跨膜蛋白,在免疫反应中起着重要作用。 IL4Ra可以与IL4和IL13结合以调节IgE的产生,并且与IL4的结合可以促进Th2细胞的分化,从而诱导哮喘的发生。[2]因此,IL4和IL4Ra的拮抗剂可降低体内IL4的水平,并可对哮喘患者发挥抗炎和抗免疫作用。 IL4和IL4Ra被认为是治疗过敏和哮喘的明星靶标。药物研发现状Dupixent(dupilumab)是Sanofi和Regeneron推出的靶向IL-4/IL-13的抗体药物,其研发进展也是靠前的。 基本信息 蛋白表达分析1) 小鼠血清中hIL4表达检测ELISA分析C57BL/6和纯合B-hIL4/hIL4Ra小鼠血清中IL4蛋白表达结果显示:在C57BL/6小鼠血清中可检测到mIL4蛋白表达, B-hIL4/hIL4Ra小鼠血清中可检测到hIL4蛋白表达。2) 小鼠脾细胞中hIL4Ra表达检测B-hIL4/hIL4Ra人源化小鼠脾细胞活化及流式检测结果显示:在C57BL/6小鼠中可检测到mIL4Ra +细胞。 在B-hIL4/hIL4Ra纯合鼠中,可检测到h IL4Ra +细胞。基于B-hIL4/hIL4Ra小鼠hIL4Ra Ab 药效评估1) 哮喘模型药效评估方案2)小鼠哮喘模型肺泡灌洗液(BALF)中免疫细胞分析  BALF( Bronchoalveolar Lavage Fluid ) 中炎性细胞分析,结果显示, Dupixent Analog给药组炎性反应明显减缓。3) 小鼠哮喘模型血清中IgE检测实验终点收集小鼠血清样本,检测分析IgE水平。再利用Dupixent Analog处理后,与阳性对照相比给药组IgE水平明显降低。基于B-hIL4/hIL4Ra小鼠哮喘模型建立及H&E染色B-hIL4/hIL4Ra小鼠建立哮喘模型后进行肺组织H&E染色。结果显示相对于PBS对照组,哮喘阳性组表现出明显的斑片状支气管周围炎性浸润,主要由嗜酸性粒细胞和淋巴细胞组成。 参考文献1.Vatrella A,et al.,Dupilumab: a novel treatment for asthma.J Asthma Allergy. 2014 Sep 4;7:123-30.2. Gandhi, Namita A., et al. "Targeting key proximal drivers of type 2 inflammation in disease." Nature Reviews Drug Discovery 15.1 (2016): 35-50.  

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抗人PD-1/PD-L1抗体药效实验肿瘤免疫疗法是当前肿瘤治疗领域中最具前景的研究方向之一,《Science》杂志将肿瘤免疫疗法评为2013年十大科学突破第一位。目前,针对PD-1/PD-L1通路抑制剂的研究受到了特别的关注。百奥赛图公司开发的B-hPD-1人源化小鼠,不仅可以用于PD-1/PD-L1信号机理研究,还可用于PD-1/PD-L1抗体的毒理研究和筛选开发,为在小鼠体内进行药物筛选和测试提供了有力工具,大大加快了抗体药物的开发进程、减少了临床前测试的时间成本,降低了药物开发的风险。 B-hPD-1 小鼠:PD-1和PD-L1抑制剂研发的有力模型C57BL/6遗传背景:目前公认的肿瘤学、生理学、免疫学、遗传学研究中常用的品系,为近交系小鼠,具有实验结果精度高,可比性好,应激反映均一等特点。Pd-1基因人源化:将包括Igv在内的部分序列进行人源化,充分保留了PD-1抗体等PD-1抑制剂的主要结合部位。抗人PD-1抗体在B-hPD-1 mice小鼠和C57BL/6小鼠上药效验证比较图1. 将小鼠结肠癌细胞MC38分别植入B-hPD-1小鼠和C57小鼠体内,并利用人PD-1抗体Ab-X2进行抗肿瘤药效实验。Ab-X2在B-hPD-1小鼠中表现出明显的抗肿瘤效应,而C57小鼠上没有。结果表明, B-hPD-1小鼠对人PD-1抗体表现出了明显的特异性,是人PD-1药效分析和验证实验的有力工具。抗人PD-L1抗体(Tecentriq)在B-hPD-1 mice小鼠和C57BL/6小鼠上药效验证比较图2.抗人PD-L1抗体(Tecentriq)在B-hPD-1 小鼠和C57BL/6小鼠上药效验证比较将改造过的小鼠结肠癌MC38细胞(人源化PD-L1并去除小鼠PD-L1)分别植入B-hPD-1小鼠(n=8)和C57BL/6(n=6)小鼠体内,并利用人PD-1抗体Tecentriq 进行抗肿瘤药效实验。Tecentriq在两种小鼠模型中均表现出明显的抗肿瘤效应。 PD-1(Keytruda)抗体不同剂量在MC38结肠癌上药效验证图3.将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hPD-1纯合小鼠皮下,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=5)。高中低不同剂量抗人PD-1抗体Keytruda给药对肿瘤生长有明显的抑制作用。其中10mg/kg剂量组对肿瘤抑制效果最佳,PD-1抗体体内药效的有力工具。其次为3mg/kg剂量组和1mg/kg剂量组。证明B-hPD-1小鼠是评估人A.肿瘤平均体积±SEM,B.小鼠平均体重±SEM。PD-1(Keytruda)抗体在淋巴瘤EL-4模型上药效验证图4.将小鼠淋巴瘤细胞EL-4移植到B-hPD-1纯合小鼠皮下,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=5)。抗人PD-1抗体Keytruda不同剂量对肿瘤生长均有抑制作用, 证明B-hPD-1小鼠是评估人PD-1抗体体内药效的有力工具。A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。PD-L1(Tecentriq)抗体在结肠癌MC38模型上药效验证图5.将改造过的小鼠结肠癌MC38细胞(人源化PD-L1并去除小鼠PD-L1)移植到B-hPD-1纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约100mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=7)。抗人PD-L1抗体Tecentriq对肿瘤生长有明显的抑制作用,证明B-hPD-1小鼠也是评估人PD-L1抗体体内药效的有力工具。A.肿瘤平均体积±SEM,B.小鼠平均体重±SEM。PD-1(Keytruda)、 PD-L1(Tecentriq)抗体与化疗药物联用数据PD-1(Keytruda)抗体与化疗药物联用体内药效图6.将小鼠结肠癌MC38细胞移植到B-hPD-1纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物分组(n=8)。结果显示:抗人PD-1抗体Keytruda和化疗药物Cisplatin联合用药组与单独用药组相比表现出更为明显的肿瘤抑制效果,证明B-hPD-1小鼠是评估人PD-1抗体与化药联合用药体内药效的有力工具。 A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。PD-L1(Tecentriq)抗体与化疗药物联用体内药效图7.将改造过的小鼠结肠癌MC38细胞(人源化PD-L1并去除小鼠PD-L1)移植到B-hPD-1纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约100mm3时将动物分组(n=7)。结果显示:抗人PD-L1抗体Tecentriq和化疗药物Cisplatin联合用药组与单独用药组相比表现出更为明显的肿瘤抑制效果,证明B-hPD-1小鼠也是评估人PD-L1抗体与化药联合用药体内药效的有力工具。A. 肿瘤平均体积±SEM,B.小鼠平均体重±SEM。利用B-hPD-1/hPD-L1人小鼠进行抗人PD-L1抗体药效验证图8.利用B-hPD-1/hPD-L1小鼠进行抗人PD-L1抗体药效验证实验将改造过的小鼠结肠癌MC38细胞(人源化PD-L1并去除小鼠PD-L1)移植到B-hPD-1/hPD-L1纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=5)。结果显示:抗人PD-L1抗体Tecentriq不同剂量组对肿瘤生长有不同抑制作用。A.肿瘤平均体积±SEM,B.小鼠平均体重±SEM。结果证明:B-hPD-1/hPD-L1小鼠是评估人PD-L1抗体体内药效的有力工具。利用B-hPD-1/hPD-L1人小鼠进行抗人PD-1、PD-L1抗体联用药效验证图9.利用B-hPD-1/hPD-L1人小鼠进行抗人PD-1、PD-L1抗体药效验证实验将改造过的小鼠结肠癌MC38细胞(人源化PD-L1并去除小鼠PD-L1)移植到B-hPD-1/hPD-L1人纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=6)。结果显示:抗人抗体Keytruda、Tecentriq联用与Keytruda组对肿瘤生长有明显的抑制作用。A.肿瘤平均体积±SEM,B.小鼠平均体重±SEM。结果证明:B-hPD-1/hPD-L1小鼠是评估人PD-1、PD-L1抗体体内药效的有力工具。

PD-1抗体与4-1BB抗体(Urelumab Analog)联用药效实验图1. 利用B-hPD-1/h4-1BB小鼠进行抗人PD-1抗体(keytruda)与4-1BB抗体(Urelumab Analog)联用药效实验 将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hPD-1/h4-1BB纯合小鼠皮下,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=6) 。结果显示:抗人PD-1抗体(keytruda)与4-1BB抗体(Urelumab Analog)联合用药组与单独用药组相比表现出更为明显的肿瘤抑制效果,证明B-hPD-1/h4-1BB小鼠是评估人PD-1抗体与人4-1BB抗体联合用药的有力工具。 A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。PD-1抗体(Keytruda)与抗人CD40抗体体内药效联用图1. 利用B-hPD-1/hCD40纯合小鼠进行抗体联用药效实验 将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hPD-1/hCD40纯合小鼠皮下,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=8) 。结果显示:抗人PD-1抗体(keytruda)与抗人CD40抗体联合用药组与单独用药组相比表现出更为明显的肿瘤抑制效果,证明B-hPD-1/hCD40小鼠是评估人PD-1抗体与人CD40抗体联合用药的有力工具。 A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。PD-1(Keytruda)抗体与人OX40抗体在联用体内药效图1. 将小鼠结肠癌MC38细胞移植到B-hPD-1/hOX40纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物分组(n=6)。结果显示:抗人PD-1抗体Keytruda和抗人OX40抗体联合用药组与单独用药组相比表现出更为明显的肿瘤抑制效果,证明B-hPD-1/hOX40小鼠是评估人PD-1抗体与人OX40抗体联合用药的有力工具。 A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。PD-1(Keytruda)抗体与人OX40抗体在B16-F10黑色素瘤模型上联用体内药效图2. 将小鼠黑色素瘤B16-F10 细胞(人源化PD-L1并去除小鼠PD-L1 )移植到B-hPD-1/hOX40纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物分组(n=5)。结果显示:抗人PD-1抗体Keytruda和抗人OX40抗体联合用药组与单独用药组相比表现出更为明显的肿瘤抑制效果,证明B-hPD-1/hOX40小鼠是评估人PD-1抗体与人OX40抗体联合用药的有力工具。 A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。利用B-hPD-1/hTIGIT人小鼠进行抗体联用药效实验图1. 利用B-hPD-1/hTIGIT小鼠进行抗人PD-1与抗体TIGIT抗体药物联用实验将小鼠结肠癌MC38细胞移植到B-hPD-1/hTIGIT纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=6)。结果显示:抗人TIGIT抗体对肿瘤生长有抑制作用,抗人PD-1抗体Keytruda可能由于使用剂量较低,在此剂量下对肿瘤抑制效果不明显。A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。PD-1(Keytruda)抗体与CTLA4(Yervoy)抗体药物联用体内药效图1. 利用B-hPD-1/hCTLA4小鼠进行抗人抗体药效验证实验将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hPD-1/hCTLA4纯合小鼠皮下,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=5)。结果显示:抗人CTLA4 抗体Yervoy和抗人PD-1抗体Keytruda分别对肿瘤生长有抑制作用,抗人CTLA4 抗体Yervoy与抗人PD-1抗体Keytruda联合用药,对肿瘤生长抑制效果最强。A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。结果证明: B-hPD-1/hCTLA4小鼠是评估人CTLA4抗体和人PD-1抗体体内药效的有力工具。PD-1(Keytruda)抗体与抗人LAG3抗体联用体内药效图1. 利用B-hPD-1/hLAG3小鼠进行抗人抗体药效验证实验将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hPD-1/hLAG3纯合小鼠皮下,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=6)。结果显示:该剂量条件的抗人LAG3 Ab对肿瘤生长无抑制作用, 抗人PD-1抗体Keytruda对肿瘤生长有抑制作用,抗人LAG3 Ab 与Keytruda 联合用药,对肿瘤生长抑制效果最强。A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。结果证明: B-hPD-1/hLAG3小鼠可以有效评估人LAG3抗体和人PD-1抗体的体内联用药效。PD-1抗体(keytruda)与TIM3抗体联用药效实验图1. 利用B-hPD-1/hTIM3小鼠进行抗人PD-1抗体(keytruda)与TIM3抗体联用药效实验 将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hPD-1/hTIM3纯合小鼠皮下,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=6) 。结果显示:抗人PD-1抗体(keytruda)与TIM3抗体联合用药组与PD-1单独用药组相比表现出更为明显的肿瘤抑制效果,证明B-hPD-1/hTIM3小鼠是评估人PD-1抗体与人TIM3抗体联合用药的有力工具。 A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。

RenMab小鼠背景介绍治疗性抗体药物具有特异性高、性质均一、可针对特定靶点定向开发等优点,在各种疾病治疗、特别是对肿瘤治疗的应用前景备受关注。小鼠因其对人类抗原的低免疫耐受性以及操作简易性被作为最常用的抗体药物开发工具。但是鼠源抗体引起的人体的排斥反应非常严重地影响抗体治疗的安全性和疗效。因此,科学有效的将鼠源抗体人源化在抗体药物开发的过程中至关重要。抗体人源化小鼠模型的问世为抗体药物开发带来了巨大的变革。敲除小鼠内源抗体基因(重链和轻链)的同时引入人源抗体基因的抗体人源化小鼠可以实现一步开发人源化抗体。通过体内筛选极大简化抗体开发流程;降低开发成本和风险提高成功率;同时显著提升抗体药物临床应用的安全性及治疗效果。RenMab小鼠是目前世界上抗体基因替换最完整的抗体人源化小鼠。采用独有的染色体工程技术将小鼠内源性抗体基因H链κ链可变区基因原位替换为人源抗体基因,保留完整的鼠源的恒定区以及重要调控元件,同时敲除鼠源λ链基因。RenMab小鼠的人源化抗体基因替换长度和完整性显著优于其他已有模型。与正常小鼠相比,RenMab小鼠的免疫系统发育并无异常。由于其具有更为丰富的抗体基因多样性,RenMab小鼠在抗体药物开发过程中具有更高的潜力。可以得到更多的强特异性,高亲和性,丰富多样性的抗体药物。RenMab小鼠的特点和优势展示1. 原位替换的改造方式确保RenMab小鼠的抗体基因模式与人体内高度一致RenMab小鼠的设计和开发是基于百奥赛图独特的染色体工程技术,对野生型小鼠H链和κ轻链的抗体基因可变区分别进行人源化替换。H链:使用长度约为1Mb的人源抗体基因可变区序列(包含所有的人源V/D/J抗体基因)替换相应鼠源长约2.6Mb的抗体基因可变区序列。κ轻链:人κ轻链可变区包含方向相反的两个拷贝,其中proximal V cluster功能区完整,是其他抗体人源化小鼠模型的所选择的主要人源化改造区域;distal V cluster虽然因为缺乏C基因而被认为是假基因,但是其中的V,J基因仍然具有潜在的功能性。我们使用包含上述两个方向相反拷贝(长度约为1.6Mb)的人源抗体基因可变区序列替换相应鼠源长约为3.2Mb的抗体基因可变区序列。同时对鼠源λ链进行全基因敲除。  Figure1 RenMab改造示意图 2. 精准的改造确保RenMab小鼠具有与野生型小鼠同样完备的免疫发育系统对RenMab小鼠的多个器官和组织进行免疫系统发育的全面检测,分析表明RenMab小鼠与野生型小鼠相比,在所有检测项目中均具有高度的一致性。RenMab小鼠与野生型小鼠的脾脏重量无显著性差异,且免疫器官发育正常。B细胞、T细胞、NK细胞等多个免疫细胞的数量,以及分化和成熟模式与野生型小鼠也高度相似。  Figure2. 脾脏和淋巴结免疫细胞分布3. 抗体基因表达高度多样性极大提高抗体药物开发的丰富程度RenMab小鼠具有人抗体H链κ轻链可变区基因全长序列信息,与市场已有抗体人源化小鼠模型相比,可以表达更加多样性的抗体分子。同时RenMab小鼠血清中不同抗体亚型检测与野生型小鼠基本无差异。RenMab小鼠的抗体基因可变区利用广泛,VDJ重排多样。利用其可以获得更多的治疗性抗体,助力抗体药物开发。    Figure3 血清中抗体亚型检测RenMab小鼠相关检测数据1.人源抗体基因可变区高度完整在DNA水平上,采用PCR-测序等技术对RenMab小鼠抗体基因进行了全面的检测。数据表明RenMab小鼠具有非常完整的人抗体基因序列。2.免疫系统发育正常经全面检测,RenMab小鼠免疫脏器发育与野生型小鼠没有显著差异。B细胞,T细胞,NK细胞,DC细胞等多种免疫细胞在细胞数量、细胞分化和成熟模式方面与野生型小鼠也高度相似。3.抗体基因表达多样采用一代,二代测序进行抗体基因表达水平的检测。检测结果表明,B细胞中表达的抗体基因在H链V/D/J区和κ链V/J区的利用具有高度多样性。同时RenMab的不同V/D/J区利用率与人体V/D/J区利用率在趋势上有相似性。4.VDJ重排具有多样性同时测序数据分析表明,B细胞中表达的抗体基因在V/D/J区之间可以进行正确的重排,并且在重排的组合方面具有丰富的多样性。5.重链CDR3长度多样性通过对RenMab小鼠抗体基因重链的CDR3区序列统计分析,数据表明CDR3区具有明显的长度多态性,长度分布在6-27个氨基酸残基之间,其中长度在13-18氨基酸残基之间分布密度最高。6.CDR3氨基酸组成与人体利用率高度相近在重链抗体基因CDR3氨基酸残基利用率分布模式方面,RenMab小鼠与人体具有较高的相似性。7.高频的体细胞超突变经过测序比对发现,RenMab小鼠抗体基因可以产生高频率体细胞超突变。其中体细胞超突变的突变数量和突变位置等方面也表现正常。8.对抗原的免疫应答正常采用多种抗原去免疫刺激RenMab小鼠,与非免疫刺激组相比, 免疫组RenMab小鼠血清的IgG和IgM水平有显著的提高,提示RenMab小鼠的免疫应答水平正常。9.抗体基因亚型转换正常通过ELISA对RenMab小鼠体内的抗体亚型检测,IgA,IGM,IgG1,IgG2,IgG3均有检测到,且各种亚型的具体含量与野生型小鼠体内含量一致。10.超强的抗体特异性和亲和力RenMab小鼠平台筛选到的人源化抗体对抗原具有很强的特异性。在亲和力方面,结合能力可以达到nmol-pmol水平。在开发强特异性和高亲和力的治疗性抗体药物方面具有很大的潜力。

自身免疫性疾病指由于自身免疫系统功能紊乱而引起机体攻击自身器官、细胞和组织的疾病,常见于类风湿性关节炎、多发性硬化症、银屑病等。目前,因其具体生物学发病机制不明确,尚不能被彻底治愈,只能通过治疗缓解症状和控制疾病进展。   可喜的是,近年有研究发现, Th17 细胞通过分泌炎症细胞因子 IL17A, 广泛参与多种自身免疫性疾病的发生、发展。通过抑制 Th17 细胞的分化或使用抗IL17的抗体能够改善自身免疫性疾病[1]。  Reciprocal relationship between regulatory T (T-reg) cells and Th17 cells[2].   今天呢,小编要为大家介绍的,便是我们专为自身免疫而改造的B-hIL17A mice以及基于该小鼠构建的自身免疫疾病新模型-EAE & 银屑病。 B-hIL17A mice 1. 基本信息  2. 蛋白质表达分析 ELISA分析C57BL/6和纯合B-hIL17A小鼠血清中IL17A蛋白含量。结果显示:C57BL/6小鼠中可检测到小鼠IL17A,在纯合B-hIL17A小鼠中可检测到人IL17A。 3.B-hIL17A小鼠白细胞亚群分析(脾脏)    流式细胞术分析C57BL/6和B-hIL17A小鼠脾脏白细胞亚群。 结果显示:纯合B-hIL17A小鼠中白细胞亚群与C57BL/6小鼠相似,表明T/B,NK,单核细胞,DC和巨噬细胞的发育不受IL17A人源化改造的影响。 4.B-hIL17A小鼠T细胞亚群分析(脾脏) 流式细胞术分析C57BL/6和B-hIL17A小鼠脾脏T细胞亚群。 结果显示:纯合B-hIL17A小鼠中的T细胞亚群与C57BL/6小鼠中相似,表明T细胞发育不受IL17A人源化改造的影响。 小结综合以上模型验证实验,表明B-hIL17A小鼠人源化改造成功,免疫系统发育情况与野生型相比基本无异,因此,可利用该小鼠进一步构建自身免疫疾病模型。MS/EAE模型   多发性硬化(multiple sclerosis, MS)是一种免疫介导的中枢神经系统炎性脱髓鞘性疾病,由自身反应性Th细胞驱动。目前,Th17淋巴细胞在MS发病机制研究已取得了重大进展(如:Th17细胞不同亚群不同程度的致病性,以及分泌效应细胞因子的作用等),经批准的MS疗法也为患者带来了明显益处, 但临床用药需求尚未完全解决。  实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是一种诱导的脱髓鞘疾病模型,其主要症状与人MS非常相似。   百奥赛图基于B-hIL17A mice构建了理想的EAE小鼠模型,可用于相关药物临床前筛选实验,模型数据如下所示: 1.EAE模型构建流程 2. EAE模型小鼠临床评分   在10周龄B-hIL17A小鼠中通过MOG35-55/CFA乳剂PTX诱导EAE(F, n = 5)。MOG:髓鞘少突胶质细胞糖蛋白; PTX:百日咳毒素。 3.EAE模型小鼠H&E及IHC染色  EAE期间小鼠中枢神经系统(CNS) 的局部炎症(F,n = 5)。在MOG/CFA和PTX免疫后第45天,取脊髓,进行腰椎切片H&E和IHC染色。结果显示:MOG组炎症细胞浸润明显增加,髓鞘蛋白明显减少。 4. EAE模型小鼠淋巴结IL17A+细胞检测 流式分析B-hIL17A小鼠淋巴结内IL-17及IFNγ蛋白表达情况(对照组 & MOG诱导组)。结果显示:MOG诱导后, B-hIL17A小鼠淋巴结中hIL-17及mIFNγ蛋白表达增加。(A)蛋白表达分析;(B)细胞数目分析。 5. EAE模型小鼠中枢神经系统(CNS)IL17A+细胞检测 流式分析B-hIL17A小鼠CNS内IL-17及IFNγ蛋白表达情况(对照组 & MOG诱导组)。结果显示:MOG诱导后,B-hIL17A小鼠CNS中hIL-17及mIFNγ蛋白表达增加。(A)蛋白表达分析;(B)细胞数目分析   6. hIL17A抗体疗效评估小鼠发病后进行hIL17A抗体治疗,检测临床评分和体重变化情况。 结果显示:hIL17A抗体处理后,临床评分水平远低于未给药对照组。 银屑病模型    银屑病,俗称“牛皮癣”,是一种慢性、复发性疾病,全球发病率约在2%-3%,其分子机理研究表明患者体内免疫细胞过度释放促炎症因子(如IL17等),先天及获得性免疫系统长期处于激活状态,从而引发多组织及器官的持续性损伤,其中角质形成细胞、树突状细胞和T细胞扮演了重要角色。  银屑病目前尚无法完全治愈,只能通过药膏,光疗,免疫抑制剂等疗法控制症状,百奥赛图基于B-hIL17A mice构建了理想的银屑病小鼠模型,以期助力更多、更有效的的药物临床前研发。 1.银屑病模型构建流程 IMQ(伊米喹莫特乳膏)局部涂抹于左耳和背部,QD x 15 2.银屑病模型小鼠表征及临床评分                                                                                                                                             Control,Day 7                   IMQ, Day 7        对照组及IMQ诱导组小鼠表征(上图)及临床评分(下图)。结果表明:IMQ显著增加皮肤炎症的临床表征。2.银屑病模型小鼠H&E染色及表皮厚度将对照组及IMQ诱导组小鼠耳部及背部皮肤进行H&E染色(上图)及厚度测量(下图)。结果显示:IMQ可显著增加耳部和背部皮肤的表皮厚度。更多模型小鼠,尽在百奥赛图,欢迎您的垂询! 参考文献:[1] doi:10. 3969 / j. issn. 1000-484X. 2018. 07. 026[2] Oukka, M. (2008). Th17 cells in immunity and autoimmunity. Annals of the Rheumatic Diseases, 67(Suppl 3), iii26 iii29.doi:10.1136/ard.2008.098004

哈喽,艾瑞巴蒂~~许久不见甚是想念,还记得我们百奥赛图知识扩展课堂上期的内容吗?(点击回顾)今天的大风正式宣告了冬天的来临,各位小主要记得添衣哦。在这大风呼啸的初冬时节,知识扩展课堂为大家带来了一种抗炎因子--白细胞介素10(IL-10),下边我们一起来看看这种免疫调节的重要细胞因子吧。功能简介白细胞介素10 (IL-10),也被称为人类细胞因子合成抑制因子(CSIF),是一种抗炎细胞因子。在人类中,白细胞介素10是由IL10基因编码的。IL-10信号通过两个IL10同源二聚体与一个由两个IL-10受体-1和两个IL-10受体-2蛋白组成的异源四聚体受体复合物传递。下游通过JAK1和Tyk2分别磷酸化IL-10受体1+IL-10受体2的胞质尾端来诱导STAT3信号传递。IL10通过活化的巨噬细胞来抑制炎症因子如TNF、IL-6、IL-1的表达。IL-10是一种具有重要免疫调节功能的多效细胞因子,主要由抗原呈递细胞如活化的 T 细胞、单核细胞、B 细胞和巨噬细胞分泌。IL10可以影响免疫系统中许多细胞类型的活动。IL-10与各种癌症如伯基特淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤和非小细胞肺癌的生存、增殖和抗凋亡活性相关。IL-10 signaling pathway[1] IL-10相关的主要在研药物见下表,其主要是形式有IL-10融合蛋白、聚乙二醇化IL-10和腺病毒三种,适应症包括肿瘤、肠炎,只有Pegilodecakin进入临床阶段。Pegilodecakin抗肿瘤的原理是IL-10能够促进人体免疫系统中称为CD8+ T免疫细胞的存活、扩增和杀伤力(细胞毒性)。CD8+ T细胞可以识别和杀死癌细胞,促进增加肿瘤内CD8+ T细胞水平,可能改善患者的预后和生存。 表1、IL-10相关的主要在研药物 品系信息验证数据1.1 RT-PCR 图1. 纯合B-hIL10 mice脾细胞中可检测到人源IL10 mRNA,检测不到鼠源IL10 mRNA。1.2 ELISA检测蛋白表达 图2. 野生型C57BL/6mice和纯合B-hIL10 mice血清ELISA检测LPS刺激后,野生型C57BL/6小鼠仅表达鼠源IL10,B-hIL10小鼠仅表达人源IL10.(n=3)1.3 B-hIL10小鼠脾脏免疫细胞分型   图3. 脾脏免疫细胞分型流式细胞术检测野生型C57BL/6小鼠和B-hIL10小鼠(n=3)脾脏免疫细胞分型,结果显示纯合B-hIL10小鼠免疫细胞分型与野生型小鼠相似。说明其T、B、NK、DC、单核细胞、巨噬细胞分化未受到IL10人源化影响。1.4 脾脏T细胞分型图4. 脾脏淋巴细胞T细胞分型 流式细胞术检测野生型C57BL/6小鼠和B-hIL10小鼠(n=3)脾脏淋巴细胞中的T细胞亚群比例。结果显示纯合B-hIL10小鼠与野生型C57BL/6小鼠淋巴细胞亚群有相似分布,说明其T细胞分化未受到IL10人源化影响。1.5 B-hIL10小鼠血液免疫细胞分型    图5. 血液免疫细胞分型流式细胞术检测野生型C57BL/6小鼠和B-hIL10小鼠(n=3)血液免疫细胞分型,结果显示纯合B-hIL10小鼠免疫细胞分型与野生型小鼠相似。说明其T、B、NK、DC、单核细胞、巨噬细胞分化未受到IL10人源化影响。1.6 血液T细胞分型  图6. 血液淋巴细胞T细胞分型流式细胞术检测野生型C57BL/6小鼠和B-hIL10小鼠(n=3)血液淋巴细胞中的T细胞亚群比例。结果显示纯合B-hIL10小鼠与野生型C57BL/6小鼠淋巴细胞亚群有相似分布,说明其T细胞分化未受到IL10人源化影响。参考文献[1]Schülke, S. (2018). Induction of Interleukin-10 Producing Dendritic Cells As a Tool to Suppress Allergen-Specific T Helper 2 Responses. Frontiers in Immunology, 9.