我司利用损伤的DNA会激活PARPs酶通过NAD+使核蛋白进行聚腺苷二磷酸核糖基化,从而使组蛋白与DNA分离,通过对底物的生物素标记,检测PARPs的活性,来建立检测体系。
研究内容
磷酸酶(Protein phosphatases, PPs)是体内存在的一种使蛋白或底物去磷酸化的酶类。蛋白质磷酸酶根据其去磷酸化的特定氨基酸种类,大致分为三类:蛋白质丝氨酸/苏氨酸磷酸酶和蛋白质酪氨酸磷酸酶,还包括双特异性磷酸酶。
磷酸酶在细胞功能调节和信号传导中起着至关重要的作用,参与调控细胞代谢,基因转录,细胞周期和凋亡,细胞骨架重排和细胞运动,以及蛋白质相互作用和蛋白的稳定性等。基于磷酸酶的多种功能,蛋白磷酸酶已经成为疾病治疗药物开发的重要方向,如治疗癌症,炎症,感染,糖尿病,自身免疫病等多种疾病。
在磷酸酶平台构建中,使用DiFMUP作为底物,在磷酸酶的作用下,将磷酸基团水解掉,释放出荧光基团,在360/460处检测荧光值。