免疫荧光（组织、单标）

实验原理
免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查组织内的相应抗原（或抗体）。在组织中形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素，荧光素受激发光的照射，由低能态进入高能态，而高能态的电子是不稳定的，以辐射光量子的形式释放能量后，再回到原来的低能态，这时发出明亮的荧光，利用荧光显微镜可以看见荧光所在的组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术测定含量。免疫荧光技术分直接法、间接法和补体法，最常见的为间接法。

实验步骤
（1）石蜡切片脱蜡至水，或者制作的冰冻切片用冷丙酮在4℃固定10－20分钟；
（2）抗原修复，冰冻切片无需修复；
（3）用0.01M PBST漂洗3次，每次5 min；
（4）滴加正常的血清室温封闭30 min；
（5）加未标记的特异性抗体，4℃过夜；
（6）用0.01M PBST漂洗3次，每次5 min（震荡漂洗）；
（7）加荧光标记的二抗抗体，37℃湿盒避光作用30 min；
（8） 0.01M PBST避光漂洗3次，每次5 min；
（9）甘油缓冲液封片；
（10）荧光显微镜观察。
注意事项：
1.荧光有衰减，寄回或者重拍都可能有荧光消失的现象，建议客户在下单时增加拍照张数。
2.做石蜡包埋样本保存及运输：常温置于4%多聚甲醛固定液内保存及运输（需注意固定液的量最好是组织的10倍以上，样本需完全浸泡于固定液内并防止样本贴壁固定不良，大标本最好使用大的标本瓶/袋运输，建议在大标本上按取材包埋要求做多条平行切口，以防标本中心固定不透彻。运输过程中防止固定液渗漏）。
3.做冰冻切片样本保存及运输：-80℃或液氮长期保存，干冰运输。