Edu细胞增殖检测
EdU可以在DNA复制的时候掺入到新合成的DNA链中,通过一个“Click”反应,把荧光基团标记到新合成的含有EdU的DNA上面,这样我们就能通过检测荧光而知道细胞的增殖情况了。
操作步骤
1. 细胞培养:取对数生长期细胞,以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中,培养至正常生长阶段
2. 药物处理:根据实验需要进行各种药物处理
3. EdU标记:用细胞培养基按1000:1的比例稀释EdU溶液 (试剂A),制备适量50μM EdU培养基;
注:1)EdU浓度与孵育时间相关,短时间孵育(<2h)宜采用高浓度(10~50 μM),长时间孵育(>24h)宜采用低浓度 (1~10μM);
a.如果需配置10μM EdU培养基,需调整为5000:1稀释比例;
b.配置好的培养基的保存时间取决于培养基的性质。
4. 细胞固定
5. Apollo染色
6. 图像获取及分析