Tunel法检测细胞凋亡

TUNEL细胞凋亡检测 (TUNEL Apoptosis Assay) 是一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现 180-200bp的DNA ladder。

基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞。

服务内容

1.      组织切片/细胞爬片

2.      常规TUNEL检测

3.      荧光TUNEL试剂盒检测

4.      数据整理及结果分析

*根据客户需要对细胞核进行荧光染色

客户须知：

1.      由客户提供荧光TUNEL检测试剂盒

2.      本公司保证数据的客观性、准确性，但不保证与客户预期吻合

服务价格及周期：

交货时间： 15~20天 

提供结果：

1.      成像图片（或按客户需要排列图片，达到可直接发表水平）

2.      实验详细流程

3.      原始数据

4.      标记后（处理后）的样本

样本要求：

1.      悬浮生长培养细胞的甩片或涂片

2.      贴壁生长的培养细胞 

3.      冰冻切片 

4.      常规石蜡切片 

取材保持组织新鲜（组织块以小于50px×37.5px×7.5px为宜），立即放入固定液（固定液用10%福尔马林液或4%多聚甲醛缓冲液，体积为组织块的10倍以上）中，避免干燥；对于有血迹的样本，可用PBS液或生理盐水冲洗后直接放入固定液中；经固定后的样本必须在48小时内处理。

注意事项：

1.      结果分析时注意：在坏死的晚期阶段或在高度增殖/代谢的组织细胞中可产生大量DNA片断，从而引起假阳性结果；而有些类型的凋亡性细胞死亡缺乏DNA断裂或DNA裂解不完全，以及细胞外的矩阵成分阻止TdT进入胞内反应，进而产生假阴性结果。

2.      初次检测细胞凋亡，最好设置阳性对照片。血细胞含量高的组织，尽可能延长过氧化氢的灭活时间。苏木素的复染时间需要摸索。

3.      每片所加试剂可调整，一般30~100 ul不等，但也要防止液体挥发而干片，且反应均在放置湿盒内。