利用斑马鱼模型评价化妆品伤口愈合功效

一、促进组织再生功效评价

【评价原理】

机械损伤将产生皮肤组织的结构性破坏，斑马鱼尾鳍具有自我再生功能，通过对尾鳍再生速度的观察可以评价受试物促进组织再生功效。

【实验方案】

将斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。正常对照组不做处理，模型对照组和供试品组均采用手术方法定量切断尾鳍，从而完成造模处理，供试品组中添加一定浓度的受试化妆品。避光孵育一段时间后，将各组斑马鱼在体视显微镜下拍照并保存图片，用高级图像分析软件对斑马鱼尾鳍面积进行定量分析，以尾鳍面积的增量评价受试化妆品促进组织再生功效。

【结果展示】

斑马鱼尾鳍面积

图1. 斑马鱼尾鳍面积表型图

红色区域为分析区域

可以看到，孵育相同时间后，供试品组斑马鱼尾鳍面积明显大于模型对照组，说明该化妆品具有促进组织再生功效。

【评价结论】

1.经过斑马鱼对比实验，供试品组与模型对照组相比，斑马鱼尾鳍面积明显增加。

2.本实验证实了该化妆品具有促进组织再生功效。

二、促进伤口愈合（抗炎）功效评价

【评价原理】

斑马鱼幼鱼的再生能力非常强大：切断尾鳍后，伤口立即紧缩、上皮细胞覆盖，数小时内便出现炎症反应，伤口处中性粒细胞的数量可以反映炎症反应的程度。转基因中性粒细胞荧光斑马鱼的中性粒细胞可在荧光显微镜下被明显观察，因此可以通过实时观察斑马鱼伤口附近的中性粒细胞数量评价受试物的抗炎功效。

【实验方案】

将斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。正常对照组不做处理，模型对照组和供试品组均采用手术方法定量切断尾鳍，从而完成造模处理，供试品组中添加一定浓度的受试化妆品。避光孵育一段时间后，将各组斑马鱼在荧光显微镜下拍照并保存图片，用高级图像分析软件对斑马鱼尾鳍损伤部位的中性粒细胞进行计数，以中性粒细胞相比于模型对照组的减少量评价受试化妆品促进组织再生功效。

此外，可通过Q-PCR检测IL-1β、IL-6和IL-10等炎症因子的表达，通过相关炎症因子表达量的降低评价受试化妆品的抗炎功效。

【结果展示】

1、尾鳍损伤部位中性粒细胞（推荐）

图2 斑马鱼尾鳍中性粒细胞表型图

黄色虚线区域为计算区域，绿色荧光点为中性粒细胞

可以看到，供试品组斑马鱼的中性粒细胞数目比模型对照组明显减少。

2、炎症因子的表达量（提供柱状图）

【评价结论】

1.经过各组斑马鱼的对比实验，水溶给予供试品组的斑马鱼中性粒细胞数目及炎症因子的相对表达量与模型对照组相比明显减少。

2.本实验证实了该供试品具有促进伤口愈合（抗炎）功效。

三、促进疤痕淡化

【评价原理】

    冰乙酸对皮肤伤口具有一定的损伤作用，斑马鱼皮肤表面被注射冰乙酸后，伤口部位将出现色素的聚集，口修复过程中色素含量逐渐减少。通过观察对伤口部位的色素含量的减少量可以评价受试物对伤口的愈合作用。

【实验方案】

将斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。正常对照组不做处理，模型对照组和供试品组均采用注射方式在斑马鱼躯干部位定量注射冰乙酸，受试化妆品以一定浓度水溶添加到供试品组中。各实验组在避光条件下孵育一段时间后，在显微镜下拍照保存图片，用高级图像处理软件分析斑马鱼伤口部位色素的不透光总和，计算供试品组相对于模型对照组的色素减少量，从而评价受试化妆品的促进伤口愈合功效。

【结果展示】

图3 斑马鱼躯干色素表型图

可以看到，供试品组斑马鱼躯干部位的色素含量比模型对照组明显减少。

【评价结论】

1.经过各组斑马鱼的对比实验，水溶给予供试品组的斑马鱼躯干部位色素含量与模型对照组相比明显减少。

2.本实验证实了该供试品具有促进疤痕淡化功效。

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