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杭州环特生物科技股份有限公司

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    环特生物作为斑马鱼技术应用领导者,深度挖掘、创新斑马鱼技术的应用场景,将国际领先的斑马鱼生物评价技术和基因编辑技术,成功应用于药物、功能食品、化妆品和食品的原料筛选、配方研发、质控体系打造等环节,为企业提供功效评价、安全评价以及斑马鱼实验室的建设与运营等技术咨询服务。    在斑马鱼技术应用领域,环特生物已牵头起草、参与发布各类标准11项,申请国家发明专利60项,自主开发斑马鱼技术模型170多种。公司累计有7项斑马鱼技术成果被用于药物CFDA注册申报,承担省级(含)以上科研项目7项,并联合伙伴发表SCI及核心期刊论文100余篇。两项成果分获浙江省科学技术进步奖三等奖和神农中华农业科技奖一等奖,并作为核心技术方承担2022年杭州“亚运果蔬类食品农药残留非靶向快筛斑马鱼模型构建研究”的项目。两项斑马鱼产业化项目成果鉴定,经张伯礼院士和孙宝国院士领衔的技术专家审核评定,分获“国内领先水平”和“国际先进水平”。

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【评价原理】过高的血尿酸浓度可以引起痛风,并与其他代谢类疾病相关联。斑马鱼具有与嘌呤代谢有关的黄嘌呤脱氢酶,尿酸氧化酶,尿囊素酶和尿囊酸酶。尿酸氧化酶是动物嘌呤代谢过程中一种重要的酶,能催化尿酸氧化生成尿裹素、CO2和H2O2。大多数脊椎动物的肝脏、肾脏和脑髓里均发现有此酶的存在。经过尿酸荧光试剂盒特异性反应,患有高尿酸的斑马鱼的尿酸荧光信号强度会比正常斑马鱼的尿酸荧光信号强度明显增多。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和降尿酸产品组。其中正常对照组未摄入氧嗪酸钾和黄嘌呤,模型对照组与降尿酸产品组都摄入了等量的氧嗪酸钾和黄嘌呤(氧嗪酸钾和黄嘌呤通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。降尿酸产品组在摄入氧嗪酸钾和黄嘌呤的同时摄入鲣鱼胶原肽和蛹虫草之类的降尿酸产品。服用一段时间降尿酸产品组后,我们用尿酸荧光检测试剂盒检测斑马鱼体内尿酸水平。【结果展示】图1. 斑马鱼体内尿酸水平(荧光信号强度)与模型对照组比较,*** p < 0.001可以看到,服用降尿酸产品组的斑马鱼体内尿酸水平与未摄入氧嗪酸钾和黄嘌呤的正常对照组相似,没有明显的尿酸升高现象。

环特生物可定制的斑马鱼实验模型有数百种,主要应用于化妆品,保健食品,药物功效与安全性评价、药理毒理评价、临床前研究实验、药物高通量筛选、化合物筛选、活性成分筛选、分子生物学实验、斑马鱼行为分析等,周期短、费用低、高效专业。▼斑马鱼模型实验-CRO实验外包-定制服务项目(部分)▼药物实验类服务项目(CRO外包委托实验)▼食品/保健食品功效与毒性安全性评价检测项目(部分)▼化妆品/原料 评价备案检测项目(部分)更多更详细的斑马鱼模型实验定制服务项目,请拨电话咨询 0571-83782130,项目经理手机 17364531293。环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证,自有2000m²斑马鱼生物评价实验室。环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域,已牵头起草发布团体标准10项,申请发明专利64余项,自主开发的主要斑马鱼模型150多种,发表SCI及核心期刊论文120余篇,已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报,公司已累计完成项目超5000个,建立长期合作客户600多家。

【评价原理】斑马鱼作为一种理想的人类血液毒性模型,是以其造血系统与人类造血系统在进化上高度保守性尾前提的。通过与人类造血类似的信号传导通路,斑马鱼形成了以包括红系、髓系、淋系及巨核系为主的造血系统。斑马鱼可建立多种血液系统毒性模型,主要包括红细胞、白细胞、出凝血障碍性毒性三大类,因此主要与斑马鱼中性粒细胞、巨噬细胞、红细胞和血流量相关。由于斑马鱼具有身体积小、实验周期短等优点,可以用作评估血液毒性的一种便捷模型。转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼中性粒细胞自身发出荧光,可以直接在荧光显微镜下观察中性粒细胞个数;黑色素等位基因突变斑马鱼通体透明,经过巨噬细胞染色后可以直接在显微镜下观察巨噬细胞数量;利用邻联茴香胺将斑马鱼心脏红细胞染色,在显微镜下可以直接观察红细胞数量(信号强度)。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组,分别是正常对照组和供试品组(供试品通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。处理结束后,(1)通过荧光显微镜观察并统计斑马鱼中性粒细胞数量;(2)通过染色斑马鱼巨噬观察巨噬细胞细胞数量;(3)通过邻联茴香胺染色心脏部位红细胞,在显微镜下观察心脏红细胞染色强度。【结果展示】图1.斑马鱼中性粒细胞表型图(绿色小点为中性粒细胞)可以看到,供试品组中性粒细胞个数较正常对照组明显减少。图2.斑马鱼巨噬细胞表型图(红色小点为巨噬细胞)可以看到,供试品组巨噬细胞数量较正常对照组明显减少。图3.斑马鱼红细胞抑制表型图(蓝色虚线框内为分析区域,分析红细胞染色强度)可以看到,供试品组心脏红细胞染色强度较正常对照组明显降低。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,供试品组的中性粒细胞数量、巨噬细胞数量明显减少,红细胞染色强度明显降低。2.本实验证实了此供试品诱发血液毒性。

环特生物,依托斑马鱼模型实验,可做上百种筛选模型,如动物模型药物筛选、药物高通量筛选、活性成分筛选、化合物筛选、中药新药筛选、毒性筛选、抑制剂筛选、酶活性筛选、多肽药物筛选等服务,周期短、费用低、高效专业。药物筛选项目病理药物筛选模型高通量药物筛选更多药物筛选模型及内容,请拨电话咨询 0571-83782130,项目经理手机 17364531293环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证,自有2000m²斑马鱼生物评价实验室。环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域,已牵头起草发布团体标准10项,申请发明专利64余项,自主开发的主要斑马鱼模型150多种,发表SCI及核心期刊论文120余篇,已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报,公司已累计完成项目超5000个,建立长期合作客户600多家。

环特生物,利用斑马鱼模型实验,为客户提供毒性评价、毒理学实验、急毒长毒实验、化妆品,保健食品,药物毒性评价检测、生态水质毒性检测等服务,周期短、费用低、高效专业。毒性实验-毒理学评价检测疾病/病理 毒性评价-安全性评价模型更多的毒理实验-毒性评价检测及内容,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证,自有2000m²斑马鱼生物评价实验室。环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域,已牵头起草发布团体标准10项,申请发明专利64余项,自主开发的主要斑马鱼模型150多种,发表SCI及核心期刊论文120余篇,已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报,公司已累计完成项目超5000个,建立长期合作客户600多家。

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类器官简介类器官是一种原代组织来源的成体干细胞体外自组装成的3D器官型结构,可分化为多个器官特异性的细胞类型,并能够表现出细胞与细胞之间、细胞与其周围基质之间的相互作用和空间位置形态,在体外重现人体真实器官的一些关键功能和结构,并具有稳定的表型和遗传学特征。作为新兴的生物学模型,类器官具有细胞系和动物模型所不具有的独特优势,其细胞组成和结构更加类似人体组织,可提供一个高度生理相关的系统,是基础研究的模型。同时,类器官模型相对实验动物更加经济,且时效性更高,可以提高研究效率。类器官模型的应用类器官模型的优势·速度快 ·通量高 ·临床相关性强类器官的构建建立PSC和AdSc类器官的过程● 以 iPS/ES 或成体干细胞为起点, 在 3D 环境下, 利用细胞因子将干细胞定向分化后建立的, 具有各种器官主要组织细胞类型及组织特征的微型结构。● 多能干细胞(PSC)来源的类器官是在PSCs定向分化后建立的, 首先是胚层的形成, 随后是诱导和成熟, 通过加入特定的生长和信号因子来获得所需的器官特定细胞类型。● 成体干细胞(AdSC)衍生的类器官培养需要分离组织特异性干细胞群, 然后将其嵌入细胞外基质中, 并加入明确的组织特异性生长因子, 实现类器官的增殖。类器官构建委托技术服务环特生物简介医-健-美-食产业斑马鱼技术应用服务商环特生物,已通过CNAS、CMA、ILAC-MRA、AAALAC资质认证。环特生物,是专注服务于生物医药和大健康美妆产业的一站式功效与安全评价技术提供商。经多年发展,已形成了以斑马鱼平台为核心,以类器官、哺乳动物、人体和微生物平台为特色,兼具生物医药CRO能力和大健康美妆一站式研发检测的产业平台新格局。作为斑马鱼技术应用服务商,环特生物深度挖掘、创新斑马鱼技术的应用场景,将斑马鱼模型、基因编辑技术和模型,成功应用于药物、保健食品、化妆品、功能食品的原料筛选、配方研发、生产质控、营销背书、新品备案以及斑马鱼实验室的建设运营,为企业提供全产业链条上的功效和安全评价的技术服务。类器官构建委托技术服务,请拨电话咨询 0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)。

【评价原理】斑马鱼的听觉外侧系统由内耳和侧线两个关键的感觉结构组成,斑马鱼具有典型的内耳结构,内耳的毛细胞和侧线的毛细胞在结构功能及分子水平上与哺乳动物的内耳毛细胞非常相似,包括对耳毒性药物的相似反应。经过DASPEI特异性荧光染色(呈绿色),听力损伤的斑马鱼比正常斑马鱼毛细胞明显减少或缺失(荧光减弱或者消失)。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组,分别是正常对照和服用/注射供试品组(供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内)。服用/注射药物一段时间后,我们对斑马鱼整体做毛细胞特异性染色,观察毛细胞的变化。【结果展示】图1. 斑马鱼“浓度-死亡率”效应曲线供试品最大非致死浓度(MNLC)和LC10图2. 斑马鱼毛细胞表型图绿色荧光点为听细胞聚集的神经丘可以看到,服用/注射供试品组斑马鱼毛细胞减少。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用/注射供试品组的斑马鱼毛细胞明显减少,与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有听毒性。

【评价原理】斑马鱼成鱼体长5 cm左右,其胚胎透明,在受精72 h后完成孵化,并在孵出后3个月内性成熟。成年斑马鱼的繁殖周期短(一般7 d左右),若条件适宜,成年雌性斑马鱼可定期产卵(每次200~300个)。斑马鱼与人类的基因相似率高达87%, 与哺乳类动物相比, 斑马鱼的信号传导以及生理结构和功能方面都非常相似。斑马鱼能够对药物在体内的分布情况、吸收情况、代谢以及排泄等生理动态方面提供准确的信息, 尤其对小分子所引起的内分泌紊乱、再生毒性、行为缺陷、致畸、心血管毒性、肝毒性等毒性反应与人具有高度相似性。因此,使用斑马鱼作为药物早期的安全性评价是非常可靠的。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组,分别是正常对照组和服用供试品组(供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内)。供试品通过水溶暴露给药或灌胃等方式处理斑马鱼3个月。服用一段时间供试品后,将斑马鱼固定、脱水、包埋、切片,进行H&E染色,我们观察斑马鱼各组织脏器结构病理变化。【结果展示】图1. 斑马鱼致癌性表型图可以看到,服用供试品组11.1 µg/mL浓度组组织结构异常,产生癌变。异位的精原细胞簇可见于中央小叶,远离基膜。精子生成明显减少。【评价结论】1.经过每组10尾斑马鱼的对比实验,服用供试品组的斑马鱼精巢结构明显异常,与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有致癌性。

【评价原理】斑马鱼皮肤结构与功能与人类高度相似,斑马鱼皮肤含有基底层、棘层、颗粒层、透明层和表皮角质细胞层;另外尚有与人皮肤结构相同的固有层、半桥粒、黑色素细胞、血管和皮下脂肪细胞等。斑马鱼皮肤间质结缔组织、胶原及其临近的纤维母细胞及皮肤基因表达亦与人类皮肤相似。我们评价斑马鱼皮肤肌肉毒性有4个指标:1.皮肤刺激;2.肌肉纹理;3.皮肤凋亡细胞定量;4.皮肤色素变化。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组,分别是正常对照组和供试品组(供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内)。皮肤吸收供试品一段时间后,我们通过中性粒转基因荧光斑马鱼,观察皮肤/肌肉刺激性;通过表型拍照,观察肌肉纹理及皮肤色素变化;通过AO染色凋亡细胞,观察皮肤细胞凋亡情况。【结果展示】图1. 斑马鱼皮肤刺激性典型图片可以看到,供试品组皮肤/肌肉可见明显中性粒细胞聚集。图2. 斑马鱼皮肤损伤典型图片可以看到,供试品组可见明显肌肉纹理不清晰。图3. 斑马鱼凋亡细胞表型图可以看到,供试品组尾部可见明显凋亡(绿色荧光亮点)。图4. 斑马鱼皮肤色素异常表型图可以看到,供试品组躯干可见明显色素异常(黄色虚线区域)。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,供试品组的斑马鱼皮肤肌肉产生明显的毒性表型(包括肌肉纹理异常和色素异常),在斑马鱼尾部可见明显的凋亡细胞,在躯干部可见明显的中性粒细胞聚集。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有皮肤肌肉毒性。

【评价原理】免疫毒性是指化合物对机体免疫系统的损伤作用,包括两类,一是免疫抑制,即免疫系统的广泛抑制,可致机体对感染的易感性增加及肿瘤发生率增高;另一是免疫增强,即免疫系统反应性过度增强,可能包括免疫性产生,过敏反应(超敏反应或变态反应)、自身免疫反应以及不良免疫刺激等。斑马鱼具有先天免疫系统和获得性免疫系统,与果蝇和线虫模型相比,斑马鱼的免疫系统发育的更完整。研究证实斑马鱼与哺乳动物一样,具有T细胞、B细胞、自然杀伤细胞,其免疫系统对于环境中的免疫毒性物质(包括哺乳动物)非常的敏感。免疫毒性指标有3个:(1)应用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼,观察中性粒细胞数量;(2)应用转基因巨噬细胞绿色荧光斑马鱼,观察巨噬细胞数量(荧光强度);(3)注射红色荧光微球,巨噬细胞吞噬微球排出体外,用体内微球的数量反映巨噬细胞吞噬功能。(4)检测T/B相关基因(rag1和rag2)表达。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成二组,分别是正常对照和服用/注射供试品组(供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内)。服用/注射供试品一段时间后,我们对斑马鱼检测中性粒细胞和巨噬细胞计数、巨噬细胞吞噬功能和T/B相关基因(rag1和rag2)表达。【结果展示】(1)中性粒细胞数量 图1. 斑马鱼中性粒细胞表型图绿色小点为中性粒细胞可以看到,服用供试品组斑马鱼体内中性粒细胞数量比正常对照组明显减少。(2)巨噬细胞数量图2. 斑马鱼巨噬细胞表型图可以看到,服用供试品组斑马鱼体内巨噬细胞数量比正常对照组明显减少。(3)巨噬细胞吞噬功能图3. 斑马鱼巨噬细胞表型图可以看到,服用供试品组的吞噬颗粒的巨噬细胞数量与正常对照组比较有明显减少,说明巨噬细胞吞噬功能下降。(4)T/B相关基因表达(rag1和rag2)图4. 斑马鱼rag1和rag2表达左图为rag1基因相对表达量,右图为rag2基因相对表达量可以看到,服用供试品组的rag1和rag2相对表达量与正常对照组比较均有减少。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用供试品组的中性粒细胞和巨噬细胞数量与正常对照组比较均有减少,其巨噬细胞吞噬功能有所下降,且rag1和rag2相对表达量减少。2.本实验证实了该供试品具有免疫毒性。

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