类器官简介

类器官是一种原代组织来源的成体干细胞体外自组装成的3D器官型结构，可分化为多个器官特异性的细胞类型，并能够表现出细胞与细胞之间、细胞与其周围基质之间的相互作用和空间位置形态，在体外重现人体真实器官的一些关键功能和结构，并具有稳定的表型和遗传学特征。

作为新兴的生物学模型，类器官具有细胞系和动物模型所不具有的独特优势，其细胞组成和结构更加类似人体组织，可提供一个高度生理相关的系统，是基础研究的模型。同时，类器官模型相对实验动物更加经济，且时效性更高，可以提高研究效率。

类器官模型的应用

类器官模型的优势

·速度快 ·通量高 ·临床相关性强

类器官的构建

建立PSC和AdSc类器官的过程

● 以 iPS/ES 或成体干细胞为起点, 在 3D 环境下, 利用细胞因子将干细胞定向分化后建立的, 具有各种器官主要组织细胞类型及组织特征的微型结构。

● 多能干细胞(PSC)来源的类器官是在PSCs定向分化后建立的, 首先是胚层的形成, 随后是诱导和成熟, 通过加入特定的生长和信号因子来获得所需的器官特定细胞类型。

● 成体干细胞(AdSC)衍生的类器官培养需要分离组织特异性干细胞群, 然后将其嵌入细胞外基质中, 并加入明确的组织特异性生长因子, 实现类器官的增殖。

类器官构建委托技术服务

环特生物简介

医-健-美-食产业斑马鱼技术应用服务商

环特生物，已通过CNAS、CMA、ILAC-MRA、AAALAC资质认证。

环特生物，是专注服务于生物医药和大健康美妆产业的一站式功效与安全评价技术提供商。经多年发展，已形成了以斑马鱼平台为核心，以类器官、哺乳动物、人体和微生物平台为特色，兼具生物医药CRO能力和大健康美妆一站式研发检测的产业平台新格局。

作为斑马鱼技术应用服务商，环特生物深度挖掘、创新斑马鱼技术的应用场景，将斑马鱼模型、基因编辑技术和模型，成功应用于药物、保健食品、化妆品、功能食品的原料筛选、配方研发、生产质控、营销背书、新品备案以及斑马鱼实验室的建设运营，为企业提供全产业链条上的功效和安全评价的技术服务。

类器官构建委托技术服务，请拨电话咨询 0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）。

【评价原理】

过高的血尿酸浓度可以引起痛风,并与其他代谢类疾病相关联。斑马鱼具有与嘌呤代谢有关的黄嘌呤脱氢酶，尿酸氧化酶，尿囊素酶和尿囊酸酶。尿酸氧化酶是动物嘌呤代谢过程中一种重要的酶,能催化尿酸氧化生成尿裹素、CO2和H2O2。大多数脊椎动物的肝脏、肾脏和脑髓里均发现有此酶的存在。

经过尿酸荧光试剂盒特异性反应，患有高尿酸的斑马鱼的尿酸荧光信号强度会比正常斑马鱼的尿酸荧光信号强度明显增多。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和降尿酸产品组。其中正常对照组未摄入氧嗪酸钾和黄嘌呤，模型对照组与降尿酸产品组都摄入了等量的氧嗪酸钾和黄嘌呤（氧嗪酸钾和黄嘌呤通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。降尿酸产品组在摄入氧嗪酸钾和黄嘌呤的同时摄入鲣鱼胶原肽和蛹虫草之类的降尿酸产品。

服用一段时间降尿酸产品组后，我们用尿酸荧光检测试剂盒检测斑马鱼体内尿酸水平。

【结果展示】

图1. 斑马鱼体内尿酸水平（荧光信号强度）

与模型对照组比较，*** p < 0.001

可以看到，服用降尿酸产品组的斑马鱼体内尿酸水平与未摄入氧嗪酸钾和黄嘌呤的正常对照组相似，没有明显的尿酸升高现象。

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环特生物，利用斑马鱼模型实验，为客户提供毒性评价、毒理学实验、急毒长毒实验、化妆品,保健食品,药物毒性评价检测、生态水质毒性检测等服务，周期短、费用低、高效专业。

毒性实验-毒理学评价检测

疾病/病理 毒性评价-安全性评价模型

更多的毒理实验-毒性评价检测及内容，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293

环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²斑马鱼生物评价实验室。

环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。

环特生物可定制的斑马鱼实验模型有数百种，主要应用于化妆品,保健食品,药物功效与安全性评价、药理毒理评价、临床前研究实验、药物高通量筛选、化合物筛选、活性成分筛选、分子生物学实验、斑马鱼行为分析等，周期短、费用低、高效专业。

▼斑马鱼模型实验-CRO实验外包-定制服务项目（部分）

▼药物实验类服务项目（CRO外包委托实验）

▼食品/保健食品功效与毒性安全性评价检测项目（部分）

▼化妆品/原料 评价备案检测项目（部分）

更多更详细的斑马鱼模型实验定制服务项目，请拨电话咨询 0571-83782130，项目经理手机 17364531293。

环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²斑马鱼生物评价实验室。

环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。

【评价原理】

斑马鱼作为一种理想的人类血液毒性模型，是以其造血系统与人类造血系统在进化上高度保守性尾前提的。通过与人类造血类似的信号传导通路，斑马鱼形成了以包括红系、髓系、淋系及巨核系为主的造血系统。斑马鱼可建立多种血液系统毒性模型，主要包括红细胞、白细胞、出凝血障碍性毒性三大类，因此主要与斑马鱼中性粒细胞、巨噬细胞、红细胞和血流量相关。由于斑马鱼具有身体积小、实验周期短等优点，可以用作评估血液毒性的一种便捷模型。

转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼中性粒细胞自身发出荧光，可以直接在荧光显微镜下观察中性粒细胞个数；黑色素等位基因突变斑马鱼通体透明，经过巨噬细胞染色后可以直接在显微镜下观察巨噬细胞数量；利用邻联茴香胺将斑马鱼心脏红细胞染色，在显微镜下可以直接观察红细胞数量（信号强度）。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和供试品组(供试品通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。

处理结束后，(1)通过荧光显微镜观察并统计斑马鱼中性粒细胞数量；(2)通过染色斑马鱼巨噬观察巨噬细胞细胞数量；(3)通过邻联茴香胺染色心脏部位红细胞，在显微镜下观察心脏红细胞染色强度。

【结果展示】

图1.斑马鱼中性粒细胞表型图

（绿色小点为中性粒细胞）

可以看到，供试品组中性粒细胞个数较正常对照组明显减少。

图2.斑马鱼巨噬细胞表型图

（红色小点为巨噬细胞）

可以看到，供试品组巨噬细胞数量较正常对照组明显减少。

图3.斑马鱼红细胞抑制表型图

（蓝色虚线框内为分析区域,分析红细胞染色强度）

可以看到，供试品组心脏红细胞染色强度较正常对照组明显降低。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，供试品组的中性粒细胞数量、巨噬细胞数量明显减少，红细胞染色强度明显降低。

2.本实验证实了此供试品诱发血液毒性。

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【评价原理】

铅中毒的器官主要是造血系统、心脏和神经系统。对于儿童的神经系统损伤导致智商降低，注意力缺陷多动障碍以及阅读和学习能力下降，其毒性机制与神经元生长和轴索束变化相关。

通过斑马鱼体内铅含量、轴索荧光强度和运动神经长度检测，铅中毒的斑马鱼体内铅含量明显比正常斑马鱼的高很多，而轴索荧光强度和运动神经长度铅中毒斑马鱼均明显少于正常斑马鱼。由于斑马鱼可被整体免疫荧光染色以及转基因荧光鱼运动神经发荧光的特性，我们可以通过荧光强度观察到明显的轴索细胞和运动神经的变化。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成五组，分别是正常对照组、模型对照组和服用促排铅剂组。其中正常对照组未摄入铅，模型对照组与服用促排铅剂组都摄入了等量的铅（铅通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用促排铅剂组在摄入铅的同时摄入绿豆肽复方之类的促排铅剂。

服用一段时间促排铅剂后，我们（1）检测体内铅含量；（2）用荧光显微镜采集轴索荧光强度；（3）用荧光显微镜采集运动神经长度。

【结果展示】

（1）体内铅含量：

图1. 斑马鱼体内铅含量

与模型对照组比较，*p < 0.05

可以看到，服用排铅剂组的铅含量与摄入相同铅的模型对照组比较相似明显减少。

（2）轴索荧光强度：

可以看到，服用排铅剂组脑部轴索荧光强度与摄入相同铅的模型对照组比较明显增加。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用促排铅剂组的铅含量、轴索荧光强度和运动神经长度与未摄入铅的正常对照组相似，并未出现模型对照组的铅含量升高，轴索荧光强度和运动神经长度减少的情况。

2.本实验证实了绿豆多肽复方具有明显的促排铅功效。

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【评价原理】

斑马鱼拥有与人类相似的神经组织器官，下丘脑、丘脑、基底神经节、边缘系统等都是与焦虑相关的脑区。1-（3-氯苯基）哌嗪盐酸盐(mCPP)是一种非特异性5 -羟色胺（5-HT）能激动剂，5-HT广泛存在于上述脑区。研究表明mCPP可通过影响5-HT通路而诱导焦虑。氨基丁酸（GABA）是哺乳动物中枢神经系统中广泛分布的一种抑制性神经递质，脑中GABA水平的下降会产生抑郁、紧张、焦虑、失眠等情绪问题。谷氨酸脱羧酶(GAD)是谷氨酸向GABA转化的限速酶。单胺氧化酶（MAO）是一种具有多个结合部位的单一分子酶，对底物的特异性不高，可使多种胺类氧化脱氨，从而影响多种神经递质的代谢，斑马鱼体内只有一种Mao序列，具有人MAO-A和人MAO-B的性质，且与人MAO-A更相似。在大多数物种中，MAO-A降解5-HT。研究表明斑马鱼的运动活动和趋向性是反映焦虑的两个重要指标。GAD2基因与焦虑和情感障碍关系密切。5-HT通过5-羟色胺受体2A（htr2aa）增加焦虑样行为。GABA-A受体在焦虑发生中起重要作用。研究表明MAO-A/B双敲除小鼠的5-HT分解降低，焦虑增加。

因此，我们可以通过检测斑马鱼的行为来判断斑马鱼是否产生焦虑。同时还可以通过检测焦虑相关基因（如gabra1、gad2、htr2aa基因）相对表达量以及MAO含量来评价斑马鱼是否产生焦虑。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用焦虑改善剂组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组与服用焦虑改善剂组都摄入了等量的mCPP（mCPP通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用焦虑改善剂组在摄入mCPP的同时摄入司来吉兰之类的焦虑改善剂。

服用一段时间焦虑改善剂后，我们（1）分析斑马鱼的总运动距离；（2）用q-PCR检测焦虑相关基因表达；（3）用试剂盒检测单胺氧化酶（MAO）活性。

【结果展示】

（1）行为学：

可以看到，服用焦虑改善剂组斑马鱼gabra1基因相对表达量与正常对照组比较相似，较模型对照组明显增加。

可以看到，服用焦虑改善剂组斑马鱼htr2aa基因相对表达量与正常对照组比较相似，较模型对照组明显降低。

（3）单胺氧化酶（MAO）活性：

图5. 斑马鱼单胺氧化酶活性量

与模型对照组比较，*p < 0.05

可以看到，服用焦虑改善剂组斑马鱼单胺氧化酶活性与正常对照组比较相似，较模型对照组明显降低。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用焦虑改善剂组斑马鱼总运动距离、gabra1、gad2和htr2aa基因相对表达量及MAO活性与正常对照组相似。

2.本实验证实了司来吉兰有明显抗焦虑功效。

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【评价原理】

酒精进入人体后90%进入肝脏进行代谢，长期过量饮酒诱发酒精性脂肪肝，临床表现为肝脏受脂肪浸润。由于斑马鱼拥有与人类相似的消化系统，如肝脏、肠道等，消化和营养的吸收及运输与人类高度相似，在大量摄入酒精后，肝脏也会出现脂肪变性（酒精性脂肪肝）的情况。

经过脂肪特异性染色（呈红色），患有酒精性脂肪肝的斑马鱼的肝脏会明显比正常斑马鱼的肝脏要红很多，由于斑马鱼通体透明的特点，可以明显被观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用解酒剂组。其中正常对照组未摄入酒精，模型对照组与服用解酒剂组都摄入了等量的酒精（酒精通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用解酒剂组在摄入酒精的同时摄入RU21、海王金樽之类的解酒剂。

服用一定时间解酒剂后，我们对斑马鱼整体做脂肪特异性染色，观察肝脏的脂肪变化，同时制作成病理切片观察肝脏的病理结构变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼酒精性脂肪肝表型图

黄色虚线区域为肝脏，肝脏内红色代表脂肪

可以看到，服用解酒剂组的肝脏情况与未摄入酒精的正常对照组比较相似，没有明显的脂肪沉积。

图2. 肝脏病理切片

黄色箭头指向脂肪颗粒

从病理切片中也能看出来，酒精性脂肪肝斑马鱼的肝脏有很多脂肪颗粒，而服用解酒剂组的肝脏情况与未摄入酒精的正常对照组都没有出现类似的脂肪颗粒。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用解酒剂组的肝脏情况与未摄入酒精的正常对照组相似，并未出现模型对照组的出现大量脂肪颗粒（酒精性脂肪肝）的情况。

2.本实验证实了RU21、海王金樽解酒剂具有疏肝解酒（酒精性脂肪肝防治）功效。

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【评价原理】

醉酒实为急性乙醇中毒，使人大脑兴奋，引起行为异常。乙醇进入人体后90%进入肝脏进行代谢，乙醇脱氢酶（ADH）可以将其氧化为乙醛，在乙醛脱氧酶（ALDH）催化下，乙醛转化为乙酸，最后转化为二氧化碳和水。在ADH和ALDH两种酶的作用下，乙醇能够被机体代谢而避免引起机体损伤。由于斑马鱼拥有与人类相似的消化系统，如肝脏、肠道等，消化和营养的吸收及运输与人类高度相似，当乙醇被过量摄入后，经过代谢产生大量乙醛，致使乙醛在体内积累，出现醉酒现象。

解酒有两种评价方法：1. 总运动距离，应用行为分析仪分析斑马鱼的运动轨迹，醉酒斑马鱼的总运动距离比正常斑马鱼明显增多。2. ADH和ALDH两种酶的含量，通过检测斑马鱼体内ADH和ALDH两种酶的含量，分析两种酶的调节作用。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用解酒剂组。其中正常对照组未摄入酒精，模型对照组和服用解酒剂组都摄入了等量的酒精（酒精通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用解酒剂组在摄入酒精之前摄入RU21、海王金樽之类的解酒剂。

服用一段时间解酒剂后，应用行为分析仪分析摄入酒精后的斑马鱼总运动距离；同时用ALDH和ADH试剂盒检测两种酶的含量。

【结果展示】

图1. 斑马鱼运动轨迹图

黑线：慢速运动轨迹；绿线：中速运动；红线：快速运动，红线代表醉酒行为状态

可以看到，服用解酒剂组的运动轨迹与模型对照组比较，快速运动明显减少，醉酒行为有所改善。

从柱状图中可以出来，服用解酒剂组的ADH和ALDH两种酶含量与模型对照组比较明显增高。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用解酒剂组的总运动距离与模型对照组比较明显降低，并ADH和ALDH两种酶含量明显增高。

2.本实验证实了RU21、海王金樽具有明显的解酒功效。

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【评价原理】

缺氧可能导致心血管系统、呼吸系统、神经系统、消化系统等等一系列危害身体的疾病。斑马鱼心血管系统在分子信号通路上与人和哺乳动物的同源性达到85%以上,近年来斑马鱼广泛地被用于心血管疾病研究领域。因此，斑马鱼适用于评价耐缺氧功效。亚硝酸钠中毒是临床常见的一种化学性中毒，将正常的血红蛋白氧化成为高铁血红蛋白而失去携氧能力，造成组织细胞缺氧。统计斑马鱼的死亡情况。

经过解剖显微镜观察，通过斑马鱼死亡率的差别判断耐缺氧功效。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用耐缺氧剂组。其中正常对照组未服用亚硝酸钠，模型对照组与服用耐缺氧剂组都摄入了等量的亚硝酸钠（亚硝酸钠通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用耐缺氧剂组在摄入亚硝酸钠之前摄入红景天苷之类的耐缺氧剂。

服用耐缺氧剂一段时间后，我们统计斑马鱼死亡和存活情况。

【结果展示】

图1. 斑马鱼死亡和存活数量

可以看到，服用耐缺氧剂组未出现模型对照组死亡率明显增多的情况。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用耐缺氧剂组未出现模型对照组死亡率明显增多的情况。

2.本实验证实了红景天苷具有明显的耐缺氧功效。

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