● 中国斑马鱼技术产业应用史,就是环特生物发展史。作为斑马鱼技术应用的全球领导者,凭借20年技术积累,环特生物已创建了以斑马鱼+类器官+哺乳动物+人体为核心的“四位一体”的综合性技术服务平台,相继形成了科研及研发服务、智慧实验室建设和精准医疗三大商业模式。可面向药物、营养保健食品、化妆品行业的企业及医院、高校等科研单位,开展原料筛选、新产品开发研究、功效研究和安全评价等技术服务。 ● 知识产权方面,环特生物已牵头起草、发布团体标准11项,申请国家发明专利64项。自主开发斑马鱼模型170多种,发表SCI及核心期刊论文170余篇(最高IF=23.17)、英文专著1部。有7个新药项目,成功将环特生物斑马鱼实验数据用于NMPA(国家药监局)的临床试验申报。1项成果获浙江省科学技术进步奖三等奖,并作为核心技术方承担2022年杭州“亚运果蔬类食品农药残留非靶向快筛斑马鱼模型构建研究”的项目。2项斑马鱼产业化项目成果鉴定,经张伯礼院士和孙宝国院士领衔的技术专家审核,分别被评定为“国内领先水平”和“国际先进水平”。 ● 环特生物已通过国家CNAS实验室认可、CMA资质认定及AAALAC国际实验动物认证、实验动物生产与使用许可证,多项技术成果先后荣获德国纽伦堡,俄罗斯,英国,中国四大国际发明展金奖、农业农村部神农中华农业科技一等奖、中国乳制品工业协会技术发明二等奖等多项权威大奖,被评为国家高新技术企业、院士专家工作站、省级高新技术企业研发中心、浙江省博士后科研工作站等,与中国农科院质标所成立了“农业农村部农产品质量标准研究中心生物评价实验室”的联合创新平台。 ● 目前,环特生物已在杭州、南京、广州、北京、上海和波士顿,布局六大创新实验中心,为各区域客户提供本地化、高效的实验外包服务。已累计完成项目超8000个,长期合作的国内外企业、研发机构和科研院校客户800多家。 ● 部分服务项目:一站式生物评价技术解决方案、产品功效与安全性评价、原料配方筛选验证、药效评价与药物筛选、毒理药理评价、临床前研究、斑马鱼基因编辑、类器官培养与试剂售卖、小鼠实验平台、科研课题研究、斑马鱼实验室建设、斑马鱼养殖系统与技术授权培训等。
[更多详情]类器官简介
类器官是一种原代组织来源的成体干细胞体外自组装成的3D器官型结构,可分化为多个器官特异性的细胞类型,并能够表现出细胞与细胞之间、细胞与其周围基质之间的相互作用和空间位置形态,在体外重现人体真实器官的一些关键功能和结构,并具有稳定的表型和遗传学特征。
作为新兴的生物学模型,类器官具有细胞系和动物模型所不具有的独特优势,其细胞组成和结构更加类似人体组织,可提供一个高度生理相关的系统,是基础研究的模型。同时,类器官模型相对实验动物更加经济,且时效性更高,可以提高研究效率。
类器官模型的应用
类器官模型的优势
·速度快 ·通量高 ·临床相关性强
类器官的构建
建立PSC和AdSc类器官的过程
● 以 iPS/ES 或成体干细胞为起点, 在 3D 环境下, 利用细胞因子将干细胞定向分化后建立的, 具有各种器官主要组织细胞类型及组织特征的微型结构。
● 多能干细胞(PSC)来源的类器官是在PSCs定向分化后建立的, 首先是胚层的形成, 随后是诱导和成熟, 通过加入特定的生长和信号因子来获得所需的器官特定细胞类型。
● 成体干细胞(AdSC)衍生的类器官培养需要分离组织特异性干细胞群, 然后将其嵌入细胞外基质中, 并加入明确的组织特异性生长因子, 实现类器官的增殖。
类器官构建委托技术服务
环特生物简介
医-健-美-食产业斑马鱼技术应用服务商
环特生物,已通过CNAS、CMA、ILAC-MRA、AAALAC资质认证。
环特生物,是专注服务于生物医药和大健康美妆产业的一站式功效与安全评价技术提供商。经多年发展,已形成了以斑马鱼平台为核心,以类器官、哺乳动物、人体和微生物平台为特色,兼具生物医药CRO能力和大健康美妆一站式研发检测的产业平台新格局。
作为斑马鱼技术应用服务商,环特生物深度挖掘、创新斑马鱼技术的应用场景,将斑马鱼模型、基因编辑技术和模型,成功应用于药物、保健食品、化妆品、功能食品的原料筛选、配方研发、生产质控、营销背书、新品备案以及斑马鱼实验室的建设运营,为企业提供全产业链条上的功效和安全评价的技术服务。
类器官构建委托技术服务,请拨电话咨询 0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)。
【评价原理】
过高的血尿酸浓度可以引起痛风,并与其他代谢类疾病相关联。斑马鱼具有与嘌呤代谢有关的黄嘌呤脱氢酶,尿酸氧化酶,尿囊素酶和尿囊酸酶。尿酸氧化酶是动物嘌呤代谢过程中一种重要的酶,能催化尿酸氧化生成尿裹素、CO2和H2O2。大多数脊椎动物的肝脏、肾脏和脑髓里均发现有此酶的存在。
经过尿酸荧光试剂盒特异性反应,患有高尿酸的斑马鱼的尿酸荧光信号强度会比正常斑马鱼的尿酸荧光信号强度明显增多。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和降尿酸产品组。其中正常对照组未摄入氧嗪酸钾和黄嘌呤,模型对照组与降尿酸产品组都摄入了等量的氧嗪酸钾和黄嘌呤(氧嗪酸钾和黄嘌呤通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。降尿酸产品组在摄入氧嗪酸钾和黄嘌呤的同时摄入鲣鱼胶原肽和蛹虫草之类的降尿酸产品。
服用一段时间降尿酸产品组后,我们用尿酸荧光检测试剂盒检测斑马鱼体内尿酸水平。
【结果展示】
图1. 斑马鱼体内尿酸水平(荧光信号强度)
与模型对照组比较,*** p < 0.001
可以看到,服用降尿酸产品组的斑马鱼体内尿酸水平与未摄入氧嗪酸钾和黄嘌呤的正常对照组相似,没有明显的尿酸升高现象。
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环特生物可定制的斑马鱼实验模型有数百种,主要应用于化妆品,保健食品,药物功效与安全性评价、药理毒理评价、临床前研究实验、药物高通量筛选、化合物筛选、活性成分筛选、分子生物学实验、斑马鱼行为分析等,周期短、费用低、高效专业。
▼斑马鱼模型实验-CRO实验外包-定制服务项目(部分)
▼药物实验类服务项目(CRO外包委托实验)
▼食品/保健食品功效与毒性安全性评价检测项目(部分)
▼化妆品/原料 评价备案检测项目(部分)
更多更详细的斑马鱼模型实验定制服务项目,请拨电话咨询 0571-83782130,项目经理手机 17364531293。
环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证,自有2000m²斑马鱼生物评价实验室。
环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域,已牵头起草发布团体标准10项,申请发明专利64余项,自主开发的主要斑马鱼模型150多种,发表SCI及核心期刊论文120余篇,已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报,公司已累计完成项目超5000个,建立长期合作客户600多家。
环特生物,利用斑马鱼模型实验,为客户提供毒性评价、毒理学实验、急毒长毒实验、化妆品,保健食品,药物毒性评价检测、生态水质毒性检测等服务,周期短、费用低、高效专业。
毒性实验-毒理学评价检测
疾病/病理 毒性评价-安全性评价模型
更多的毒理实验-毒性评价检测及内容,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293
环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证,自有2000m²斑马鱼生物评价实验室。
环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域,已牵头起草发布团体标准10项,申请发明专利64余项,自主开发的主要斑马鱼模型150多种,发表SCI及核心期刊论文120余篇,已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报,公司已累计完成项目超5000个,建立长期合作客户600多家。
【评价原理】
斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87%,斑马鱼肝脏中有许多与哺乳动物同源的脂质代谢酶,与哺乳动物对外源化学物质的防御机制相当,包括酶的诱导和氧化应激。而且斑马鱼幼鱼通体透明,容易观察到毒性表型。
我们评价斑马鱼肝脏毒性有4个指标:1.肝脏面积;2.肝脏变性程度;3. 卵黄囊吸收延迟的发生率(卵黄囊是脂肪,卵黄囊吸收与肝功能密切相关);4. 肝脏病理切片。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成两组,分别是正常对照和服用/注射供试品组(供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内)。
服用/注射药物一段时间后,我们观察斑马鱼肝脏及卵黄囊表型,同时制作成病理切片观察肝脏的病理结构变化。
【结果展示】
图1. 斑马鱼肝脏毒性表型图
可以看到,服用/注射供试品组斑马鱼肝脏肿大、变性、卵黄囊吸收延迟。
图2. 斑马鱼肝脏病理切片
绿色箭头指向红细胞淤积
从病理切片中可见,正常对照组肝组织结构规则,肝细胞形态完整,细胞质均匀,细胞核呈规则圆形,位于细胞中央;服用/注射供试品组的斑马鱼肝脏红细胞淤积严重,细胞肿胀现象严重,细胞核萎缩变形,位于细胞边缘,局部可见炎性浸润,坏死。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用/注射供试品组的斑马鱼肝脏产生明显的毒性表型且组织病理学改变,与正常对照组存在明显的差别。
2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有肝脏毒性。
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随着年龄的增长,人体皮肤因自身生理调节和外界因素的作用而逐渐出现雀斑、日晒斑、黄褐斑等色斑,色斑的形成与皮肤中黑色素的沉着有关,祛斑功效实质上是对黑色素的清除作用。通过班斑马鱼技术能简洁而有效的评价化妆品的祛斑功效。
【评价原理】
斑马鱼在发育初期全身透明,胚胎发育至 24 h时黑色素开始从视网膜上皮生长,48h逐渐形成稳定并可见的黑色素色斑。将受试物于斑马鱼发育48h时加入鱼水中,72h时观察黑色素的降低程度,从而评价祛斑功效
【实验方案】
我们挑选2dpf的斑马鱼分成若干组,含正常对照组和供试品组。正常对照组不做处理,供试品组使用受试化妆品,孵育24hpf后,对斑马鱼头部进行拍照,利用高级图像处理软件分析斑马鱼头部的黑色素信号强度,从而评价其祛斑功效。
【结果展示】(展示图片仅供参考,实际实验组别依据合同而定)
图1. 斑马鱼头部黑色素表型图(蓝色为分析区域)
阳性对照组和化妆品组与正常对照组对比分析,得出祛斑功效作用。
【评价结论】
1.经过各组斑马鱼对比实验,阳性对照组和化妆品组与正常对照组对比,斑马鱼头部只有少量的黑色素。
2.本实验证实了该化妆品具有祛斑作用。
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【评价原理】
炎症是免疫系统对组织损伤和感染的一种反应,主要特点就是白细胞(粒细胞、巨噬细胞)会聚集在感染组织周围。斑马鱼的免疫系统非常类似于哺乳动物。创伤发生时,中性粒细胞、巨噬细胞对创伤性炎症几乎同时作出应答,中性粒细胞迁移速度快,先募集到损伤部位,随后巨噬细胞才到达。数小时后,炎症开始消退,巨噬细胞和中性粒细胞离开损伤部位。硫酸铜损伤斑马鱼神经丘(斑马鱼体表侧线器的末稍器官),造成神经丘细胞死亡,斑鱼的中性粒细胞发生免疫应答,聚集在神经丘周围,吞噬死亡的细胞 。
采用转基因中性粒细胞荧光鱼(呈绿色),可在荧光显微镜在观察到斑马鱼体表侧线上的中性粒细胞比正常斑马鱼明显增多。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用抗炎药组。其中正常对照组未摄入硫酸铜,模型对照组和服用/注射抗炎药组均摄入硫酸铜(硫酸铜通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用/注射抗炎药组在摄入硫酸铜之前摄入吲哚美辛、阿司匹林、布洛芬和双氯芬酸之类的抗炎药。
服用一段时间抗炎药后,我们观察斑马鱼体表侧线上的中性粒细胞数量,并通过Q-PCR检测TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎症相关因子的表达。
【结果展示】
图1. 斑马鱼体表侧线上中性粒细胞表型图
黄色箭头所指为中性粒细胞
可以看到,服用/注射抗炎药组侧线上中性粒细胞与正常对照组相似,未出现中性粒细胞募集情况。
以IL-1β基因为例,提供柱状图。
图2. 斑马鱼IL-1β基因相对表达量
与模型对照组比较,**p < 0.01
可以看到,服用/注射抗炎药组斑马鱼与模型对照组比较,IL-1β基因表达明显下调。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用抗炎药组侧线上中性粒细胞数量与正常对照组数量相当,未出现模型对照组中性粒细胞募集情况,且TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎症因子明显下调。
2.本实验证实了吲哚美辛、阿司匹林、布洛芬和双氯芬酸具有显著的抗炎作用,且抑制TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎症相关因子的表达。
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【评价原理】
斑马鱼和哺乳动物的心脏有相似的功能,包括血流方向、由专门的心内膜肌肉组织驱动的高压系统、由电子系统调节的心律以及与起搏活动相关的心跳。而且斑马鱼幼鱼通体透明,血细胞在心脏和血液循环系统的堆积非常容易观察,因而利用斑马鱼模型研究心血管毒性极为方便。
我们评价斑马鱼心血管毒性有4个指标:1.心率;2.心节律;3.心包水肿面积;4.静脉瘀血面积。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成两组,分别是正常对照和服用/注射供试品组(供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内)。
服用/注射药物一段时间后,我们对斑马鱼的心脏进行观察评价。
【结果展示】
图1. 斑马鱼心血管毒性表型图
红色虚线框内为心脏
可以看到,服用/注射供试品组的斑马鱼出现明显的心包水肿。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用/注射供试品组的斑马鱼出现明显的心包水肿,与正常对照组存在明显的差别。
2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有心血管毒性。
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一、促进组织再生功效评价
【评价原理】
机械损伤将产生皮肤组织的结构性破坏,斑马鱼尾鳍具有自我再生功能,通过对尾鳍再生速度的观察可以评价受试物促进组织再生功效。
【实验方案】
将斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。正常对照组不做处理,模型对照组和供试品组均采用手术方法定量切断尾鳍,从而完成造模处理,供试品组中添加一定浓度的受试化妆品。避光孵育一段时间后,将各组斑马鱼在体视显微镜下拍照并保存图片,用高级图像分析软件对斑马鱼尾鳍面积进行定量分析,以尾鳍面积的增量评价受试化妆品促进组织再生功效。
【结果展示】
斑马鱼尾鳍面积
图1. 斑马鱼尾鳍面积表型图
红色区域为分析区域
可以看到,孵育相同时间后,供试品组斑马鱼尾鳍面积明显大于模型对照组,说明该化妆品具有促进组织再生功效。
【评价结论】
1.经过斑马鱼对比实验,供试品组与模型对照组相比,斑马鱼尾鳍面积明显增加。
2.本实验证实了该化妆品具有促进组织再生功效。
二、促进伤口愈合(抗炎)功效评价
【评价原理】
斑马鱼幼鱼的再生能力非常强大:切断尾鳍后,伤口立即紧缩、上皮细胞覆盖,数小时内便出现炎症反应,伤口处中性粒细胞的数量可以反映炎症反应的程度。转基因中性粒细胞荧光斑马鱼的中性粒细胞可在荧光显微镜下被明显观察,因此可以通过实时观察斑马鱼伤口附近的中性粒细胞数量评价受试物的抗炎功效。
【实验方案】
将斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。正常对照组不做处理,模型对照组和供试品组均采用手术方法定量切断尾鳍,从而完成造模处理,供试品组中添加一定浓度的受试化妆品。避光孵育一段时间后,将各组斑马鱼在荧光显微镜下拍照并保存图片,用高级图像分析软件对斑马鱼尾鳍损伤部位的中性粒细胞进行计数,以中性粒细胞相比于模型对照组的减少量评价受试化妆品促进组织再生功效。
此外,可通过Q-PCR检测IL-1β、IL-6和IL-10等炎症因子的表达,通过相关炎症因子表达量的降低评价受试化妆品的抗炎功效。
【结果展示】
1、尾鳍损伤部位中性粒细胞(推荐)
图2 斑马鱼尾鳍中性粒细胞表型图
黄色虚线区域为计算区域,绿色荧光点为中性粒细胞
可以看到,供试品组斑马鱼的中性粒细胞数目比模型对照组明显减少。
2、炎症因子的表达量(提供柱状图)
【评价结论】
1.经过各组斑马鱼的对比实验,水溶给予供试品组的斑马鱼中性粒细胞数目及炎症因子的相对表达量与模型对照组相比明显减少。
2.本实验证实了该供试品具有促进伤口愈合(抗炎)功效。
三、促进疤痕淡化
【评价原理】
冰乙酸对皮肤伤口具有一定的损伤作用,斑马鱼皮肤表面被注射冰乙酸后,伤口部位将出现色素的聚集,口修复过程中色素含量逐渐减少。通过观察对伤口部位的色素含量的减少量可以评价受试物对伤口的愈合作用。
【实验方案】
将斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。正常对照组不做处理,模型对照组和供试品组均采用注射方式在斑马鱼躯干部位定量注射冰乙酸,受试化妆品以一定浓度水溶添加到供试品组中。各实验组在避光条件下孵育一段时间后,在显微镜下拍照保存图片,用高级图像处理软件分析斑马鱼伤口部位色素的不透光总和,计算供试品组相对于模型对照组的色素减少量,从而评价受试化妆品的促进伤口愈合功效。
【结果展示】
图3 斑马鱼躯干色素表型图
可以看到,供试品组斑马鱼躯干部位的色素含量比模型对照组明显减少。
【评价结论】
1.经过各组斑马鱼的对比实验,水溶给予供试品组的斑马鱼躯干部位色素含量与模型对照组相比明显减少。
2.本实验证实了该供试品具有促进疤痕淡化功效。
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