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  • 类器官与pdx模型
  • 斑马鱼基因编辑

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杭州环特生物科技股份有限公司

    ● 中国斑马鱼技术产业应用史,就是环特生物发展史。作为斑马鱼技术应用的全球领导者,凭借20年技术积累,环特生物已创建了以斑马鱼+类器官+哺乳动物+人体为核心的“四位一体”的综合性技术服务平台,相继形成了科研及研发服务、智慧实验室建设和精准医疗三大商业模式。可面向药物、营养保健食品、化妆品行业的企业及医院、高校等科研单位,开展原料筛选、新产品开发研究、功效研究和安全评价等技术服务。    ● 知识产权方面,环特生物已牵头起草、发布团体标准11项,申请国家发明专利64项。自主开发斑马鱼模型170多种,发表SCI及核心期刊论文170余篇(最高IF=23.17)、英文专著1部。有7个新药项目,成功将环特生物斑马鱼实验数据用于NMPA(国家药监局)的临床试验申报。1项成果获浙江省科学技术进步奖三等奖,并作为核心技术方承担2022年杭州“亚运果蔬类食品农药残留非靶向快筛斑马鱼模型构建研究”的项目。2项斑马鱼产业化项目成果鉴定,经张伯礼院士和孙宝国院士领衔的技术专家审核,分别被评定为“国内领先水平”和“国际先进水平”。    ● 环特生物已通过国家CNAS实验室认可、CMA资质认定及AAALAC国际实验动物认证、实验动物生产与使用许可证,多项技术成果先后荣获德国纽伦堡,俄罗斯,英国,中国四大国际发明展金奖、农业农村部神农中华农业科技一等奖、中国乳制品工业协会技术发明二等奖等多项权威大奖,被评为国家高新技术企业、院士专家工作站、省级高新技术企业研发中心、浙江省博士后科研工作站等,与中国农科院质标所成立了“农业农村部农产品质量标准研究中心生物评价实验室”的联合创新平台。    ● 目前,环特生物已在杭州、南京、广州、北京、上海和波士顿,布局六大创新实验中心,为各区域客户提供本地化、高效的实验外包服务。已累计完成项目超8000个,长期合作的国内外企业、研发机构和科研院校客户800多家。    ● 部分服务项目:一站式生物评价技术解决方案、产品功效与安全性评价、原料配方筛选验证、药效评价与药物筛选、毒理药理评价、临床前研究、斑马鱼基因编辑、类器官培养与试剂售卖、小鼠实验平台、科研课题研究、斑马鱼实验室建设、斑马鱼养殖系统与技术授权培训等。

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类器官简介

类器官是一种原代组织来源的成体干细胞体外自组装成的3D器官型结构,可分化为多个器官特异性的细胞类型,并能够表现出细胞与细胞之间、细胞与其周围基质之间的相互作用和空间位置形态,在体外重现人体真实器官的一些关键功能和结构,并具有稳定的表型和遗传学特征。

作为新兴的生物学模型,类器官具有细胞系和动物模型所不具有的独特优势,其细胞组成和结构更加类似人体组织,可提供一个高度生理相关的系统,是基础研究的模型。同时,类器官模型相对实验动物更加经济,且时效性更高,可以提高研究效率。

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类器官模型的应用

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类器官模型的优势

·速度快 ·通量高 ·临床相关性强

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类器官的构建

建立PSC和AdSc类器官的过程

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● 以 iPS/ES 或成体干细胞为起点, 在 3D 环境下, 利用细胞因子将干细胞定向分化后建立的, 具有各种器官主要组织细胞类型及组织特征的微型结构。

● 多能干细胞(PSC)来源的类器官是在PSCs定向分化后建立的, 首先是胚层的形成, 随后是诱导和成熟, 通过加入特定的生长和信号因子来获得所需的器官特定细胞类型。

● 成体干细胞(AdSC)衍生的类器官培养需要分离组织特异性干细胞群, 然后将其嵌入细胞外基质中, 并加入明确的组织特异性生长因子, 实现类器官的增殖。


类器官构建委托技术服务

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环特生物简介

医-健-美-食产业斑马鱼技术应用服务商

环特生物,已通过CNAS、CMA、ILAC-MRA、AAALAC资质认证。

环特生物,是专注服务于生物医药和大健康美妆产业的一站式功效与安全评价技术提供商。经多年发展,已形成了以斑马鱼平台为核心,以类器官、哺乳动物、人体和微生物平台为特色,兼具生物医药CRO能力和大健康美妆一站式研发检测的产业平台新格局。

作为斑马鱼技术应用服务商,环特生物深度挖掘、创新斑马鱼技术的应用场景,将斑马鱼模型、基因编辑技术和模型,成功应用于药物、保健食品、化妆品、功能食品的原料筛选、配方研发、生产质控、营销背书、新品备案以及斑马鱼实验室的建设运营,为企业提供全产业链条上的功效和安全评价的技术服务。

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类器官构建委托技术服务,请拨电话咨询 0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)。


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【评价原理】

过高的血尿酸浓度可以引起痛风,并与其他代谢类疾病相关联。斑马鱼具有与嘌呤代谢有关的黄嘌呤脱氢酶,尿酸氧化酶,尿囊素酶和尿囊酸酶。尿酸氧化酶是动物嘌呤代谢过程中一种重要的酶,能催化尿酸氧化生成尿裹素、CO2和H2O2。大多数脊椎动物的肝脏、肾脏和脑髓里均发现有此酶的存在。

经过尿酸荧光试剂盒特异性反应,患有高尿酸的斑马鱼的尿酸荧光信号强度会比正常斑马鱼的尿酸荧光信号强度明显增多。

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【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和降尿酸产品组。其中正常对照组未摄入氧嗪酸钾和黄嘌呤,模型对照组与降尿酸产品组都摄入了等量的氧嗪酸钾和黄嘌呤(氧嗪酸钾和黄嘌呤通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。降尿酸产品组在摄入氧嗪酸钾和黄嘌呤的同时摄入鲣鱼胶原肽和蛹虫草之类的降尿酸产品。

服用一段时间降尿酸产品组后,我们用尿酸荧光检测试剂盒检测斑马鱼体内尿酸水平。

【结果展示】

图1. 斑马鱼体内尿酸水平(荧光信号强度)

与模型对照组比较,*** p < 0.001

可以看到,服用降尿酸产品组的斑马鱼体内尿酸水平与未摄入氧嗪酸钾和黄嘌呤的正常对照组相似,没有明显的尿酸升高现象。


更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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环特生物可定制的斑马鱼实验模型有数百种,主要应用于化妆品,保健食品,药物功效与安全性评价、药理毒理评价、临床前研究实验、药物高通量筛选、化合物筛选、活性成分筛选、分子生物学实验、斑马鱼行为分析等,周期短、费用低、高效专业

▼斑马鱼模型实验-CRO实验外包-定制服务项目(部分)

1客户定制服务项目.png

▼药物实验类服务项目(CRO外包委托实验)

2药物评价-药物实验服务项目.png

▼食品/保健食品功效与毒性安全性评价检测项目(部分)

3保健食品及原料评价检测项目.png

▼化妆品/原料 评价备案检测项目(部分)

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更多更详细的斑马鱼模型实验定制服务项目,请拨电话咨询 0571-83782130项目经理手机 17364531293

环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证,自有2000m²斑马鱼生物评价实验室。

环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域,已牵头起草发布团体标准10项,申请发明专利64余项,自主开发的主要斑马鱼模型150多种,发表SCI及核心期刊论文120余篇,已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报,公司已累计完成项目超5000个,建立长期合作客户600多家。


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环特生物,利用斑马鱼模型实验,为客户提供毒性评价、毒理学实验、急毒长毒实验、化妆品,保健食品,药物毒性评价检测、生态水质毒性检测等服务,周期短、费用低、高效专业

毒性实验-毒理学评价检测

【0】毒性评价1-毒性实验评价检测项目.png疾病/病理 毒性评价-安全性评价模型

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更多的毒理实验-毒性评价检测及内容,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293

环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证,自有2000m²斑马鱼生物评价实验室。

环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域,已牵头起草发布团体标准10项,申请发明专利64余项,自主开发的主要斑马鱼模型150多种,发表SCI及核心期刊论文120余篇,已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报,公司已累计完成项目超5000个,建立长期合作客户600多家。


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【评价原理】

斑马鱼作为一种理想的人类血液毒性模型,是以其造血系统与人类造血系统在进化上高度保守性尾前提的。通过与人类造血类似的信号传导通路,斑马鱼形成了以包括红系、髓系、淋系及巨核系为主的造血系统。斑马鱼可建立多种血液系统毒性模型,主要包括红细胞、白细胞、出凝血障碍性毒性三大类,因此主要与斑马鱼中性粒细胞、巨噬细胞、红细胞和血流量相关。由于斑马鱼具有身体积小、实验周期短等优点,可以用作评估血液毒性的一种便捷模型。

转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼中性粒细胞自身发出荧光,可以直接在荧光显微镜下观察中性粒细胞个数;黑色素等位基因突变斑马鱼通体透明,经过巨噬细胞染色后可以直接在显微镜下观察巨噬细胞数量;利用邻联茴香胺将斑马鱼心脏红细胞染色,在显微镜下可以直接观察红细胞数量(信号强度)。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组,分别是正常对照组和供试品组(供试品通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。

处理结束后,(1)通过荧光显微镜观察并统计斑马鱼中性粒细胞数量;(2)通过染色斑马鱼巨噬观察巨噬细胞细胞数量;(3)通过邻联茴香胺染色心脏部位红细胞,在显微镜下观察心脏红细胞染色强度。

【结果展示】

图1.斑马鱼中性粒细胞表型图

(绿色小点为中性粒细胞)

可以看到,供试品组中性粒细胞个数较正常对照组明显减少。

图2.斑马鱼巨噬细胞表型图

(红色小点为巨噬细胞)

可以看到,供试品组巨噬细胞数量较正常对照组明显减少。

图3.斑马鱼红细胞抑制表型图

(蓝色虚线框内为分析区域,分析红细胞染色强度)

可以看到,供试品组心脏红细胞染色强度较正常对照组明显降低。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,供试品组的中性粒细胞数量、巨噬细胞数量明显减少,红细胞染色强度明显降低。

2.本实验证实了此供试品诱发血液毒性。


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【评价原理】

斑马鱼胚胎视力发育迅速,受精后发育4天的幼鱼就已经依赖视觉线索进行捕食和躲避行为。斑马鱼不仅在角膜、晶状体、脉络膜、视网膜以及血管化和神经支配等结构上和人类的眼睛有明显的相似性,而且还有保守的基因表达、细胞构成和组织结构,因此为研究药物眼部毒性提供了一个极好的模型。

我们评价斑马鱼眼毒性有4个指标:1.眼睛大小;2.眼部细胞凋亡;3.眼部血管面积;4.眼部病理切片。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组,分别是正常对照组和供试品组,供试品组(药物通过溶解到养鱼用水中或灌胃的方式摄入到斑马鱼体内)。

服用一段时间眼保护剂后,我们在解剖显微镜下观察眼睛大小;整体做凋亡细胞特异性染色,观察眼部细胞凋亡;通过荧光显微镜观察眼部血管面积,同时制作成病理切片观察眼部的病理结构变化。

【结果展示】

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图1. 斑马鱼眼睛表型图

箭头指示区域为眼

可以看到,药物组眼睛相较于正常对照组明显减小。

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图2. 斑马鱼眼细胞凋亡表型图

黄色虚线区域为眼,绿色小点为凋亡细胞

可以看到,药物组的凋亡细胞较正常对照组明显增多。

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图3. 斑马鱼眼部血管面积

黄色虚线标记血管面积

可以看到,药物组眼睛血管面积相较于正常对照组明显增加。

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图4. 眼部凋亡细胞病理切片

可以看到,药物组出现较多的凋亡细胞,表现为细胞固缩、染色质边集,视网膜结构异于正常对照组。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,药物组斑马鱼眼睛明显变小,凋亡细胞明显增多,眼部血管面积明显增多,在病理切片中出现较多的凋亡细胞,表现为细胞固缩、染色质边集,视网膜结构异常。

2.本实验证实了药物的眼毒性。


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【评价原理】

肠道消化是食物在消化道中分解的过程,包括机械性消化(通过消化道肌肉搜索将食物与消化液混合并向消化道远端推送)和化学性消化(通过消化腺分泌的消化酶将大分子分解为小分子物质的过程)。肠道内的消化液包括胰脂肪酶、胰蛋白酶、胰淀粉酶等。在受精后的26-126 h,斑马鱼肠道的管腔形成,内胚层分化出连续的有功能的肠道上皮。斑马鱼肠道肌肉发达,可分为两层平滑肌,有利于食物的蠕动消化。

通过特异性的检测试剂盒检测OD值,可以量化斑马鱼体内胰脂肪酶和胰蛋白酶含量。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成二组,分别是正常对照和服用供试品组(供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内),加入相应的胰脂肪酶和胰蛋白酶特异性检测试剂。

服用供试品后,我们使用酶标仪对斑马鱼进行OD值的检测。

【结果展示】

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图1. 斑马鱼胰脂肪酶和胰蛋白酶OD值

可以看到,服用供试品组的胰脂肪酶和胰蛋白酶的OD值与正常对照组比较,有显著性提高。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用供试品组与正常对照组比较胰脂肪酶和胰蛋白酶含量均有明显的升高。

2.本实验证实了供试品具有促进肠道消化功能的作用,主要表现为增加胰脂肪酶和胰蛋白酶的含量。


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【评价原理】

斑马鱼胃肠道粘膜屏障系统由较完整的机械屏障、化学屏障和免疫屏障构成,与哺乳动物高度相似,可作为胃肠道粘膜屏障研究的动物模型。三硝基苯磺酸(TNBS)可破坏肠道粘膜屏障,与肠组织蛋白结合形成抗原,发生变态反应,诱发结肠炎。杯状细胞主要分泌黏蛋白,形成黏膜屏障以保护上皮细胞,肠黏膜损伤时杯状细胞数量减少。我们可以应用特异性的染料(呈蓝色),观察肠道杯状细胞数目,评价肠道粘液分泌功能。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用肠道粘膜辅助保护剂组。其中正常对照组未经任何处理,模型对照组与服用肠道粘膜辅助保护剂组都摄入了等量的TNBS(TNBS通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用肠道粘膜辅助保护剂组在TNBS诱导肠道粘膜损伤之后摄入常欣卫口服液之类的肠道粘膜辅助保护剂。

服用一段时间肠道粘膜辅助保护剂后,我们观察和分析肠道杯状细胞数目。

【结果展示】

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图1. 斑马鱼肠道杯状细胞表型图

可以看到,服用肠道粘膜辅助保护剂组的肠道杯状细胞数量与正常对照组比较相似,没有明显的减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用肠道粘膜辅助保护剂组的肠道杯状细胞量与正常对照组比较相似,没有明显的减少。

2.本实验证实了常欣卫口服液具有明显的促肠道粘液分泌功能。


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【评价原理】

正常成人的心率在每分钟60~100次之间,如果低于60次称为心动过缓,是心律失常的一个重要类型,患者平时有头晕、乏力、倦怠、精神差的症状。研究表明,斑马鱼心血管系统的发育与人高度相似,虽然斑马鱼是单心房单心室,但其心脏结构及功能与人高度保守。同时,由于斑马鱼具有透明易观察等优点,开始被大量应用于心血管疾病研究和药物心血管毒性评价当中。

维拉帕米能阻滞心肌细胞慢通道,抑制Ca2+向细胞的内流,阻碍心脏慢反应电活动,降低舒张期去极化速度,抑制窦房结的自律性,减慢心率;亦能延长房室结的有效不应期,减慢房室传导。

用解剖显微镜下观察斑马鱼心率,模型对照组斑马鱼心率较正常斑马鱼明显减慢。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和药物组。其中正常对照组未摄入维拉帕米,模型对照组与药物组都摄入了等量的维拉帕米(维拉帕米通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。药物组先摄入地高辛之类的改善心动过缓药物再摄入维拉帕米。

服用改善心动过缓药物后再加入维拉帕米共同处理至实验终点后,我们对斑马鱼统计斑马鱼的心率。

【结果展示】

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图1. 斑马鱼心动过缓柱状图

可以看到,模型对照组心率明显减慢,服用药物组的心率与正常对照组比较相似,没有明显的心率减慢。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用改善心动过缓药物组的心率相较于模型对照组。

2.本实验证实了地高辛具有明显改善心动过缓的功效。


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【评价原理】

斑马鱼心血管系统的发育与人高度相似,虽然斑马鱼是单心房单心室,但其心脏结构及功能与人高度保守。同时,由于斑马鱼具有透明易观察等优点,开始被大量应用于心血管疾病研究和药物心血管毒性评价当中。

羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶 ( HMGCR) 是他汀类药物发挥抑制作用的直接作用点, HMGCR功能被抑制会影响血管的完整性和稳定性,诱发心脏出血。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和药物组。其中正常对照组未经任何处理,模型对照组与服用改善心脏出血药物组都摄入了等量的辛伐他汀(辛伐他汀通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。药物组在摄入辛伐他汀的同时摄入淫羊藿苷之类的改善心脏出血药物。

服用改善心脏出血药物一段时间后,我们通过解剖显微镜对斑马鱼进行心脏出血发生率的统计;对斑马鱼进行行为学分析;通过心跳血流分析系统采集斑马鱼血流影像,并分析血流速度改善作用。

【结果展示】

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图1. 斑马鱼改善心脏出血表型图

可以看到,模型对照组的斑马鱼心脏有明显的出血,服用改善心脏出血药物组的心脏出血情况与正常对照组比较相似,没有明显的心脏出血。

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图2. 斑马鱼运动改善表型图

可以看到,模型对照组的运动距离明显减少,服用改善心脏出血药物组的运动距离与正常对照组比较相似,没有明显的运动减少。

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图3. 斑马鱼改善血流柱状图

可以看到,模型组的血流速度明显减慢,服用改善心脏出血药物组的血流速度与模型对照组比较血流速度增加,没有明显的血流速度减慢。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用改善心脏出血药物组的心脏出血情况、运动距离、血流速度均有明显改善作用。

2.本实验证实了淫羊藿苷具有明显改善心脏出血的功效。


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