单克隆抗体对定制服务

配对抗体介绍

配对抗体（抗体对）指的是可以同时结合在一个抗原分子的不同抗原决定簇的两个抗体。配对抗体多用于ELISA-双抗体夹心法对目的蛋白进行定量和检测。一对配对抗体对包括捕获抗体和生物素标记的检测抗体。

抗体对在蛋白质定量中有广泛应用，夹心ELISA、化学发光和免疫层析，都离不开高质量的抗体对。武汉戴安生物技术有限公司研发团队拥有多年单抗及ELISA试剂盒开发经验，特向广大客户提供优质可靠的配对单抗定制服务。通过后期的配对优化、评估及稳定性调试等也可为客户开发相应的ELISA试剂盒，以达到不同多个水平的的检测需求。

配对抗体原理

通常情况下，一个抗原分子拥有多个抗原决定簇，将抗原注射入动物体内进行免疫，针对不同的抗原决定簇会产生不同的抗体。产生的单克隆抗体具有特异性与专一性，即一个抗体分子只会特异性地结合一个抗原决定簇。抗体配对是在抗体的基础上，对抗体进一步的开发应用，通过抗原抗体特异性结合特性，使两个针对不同抗原决定簇的抗体，有可能同时结合到抗原分子上，那么这两个抗体就是配对抗体。

我们提供的配对单抗定制服务的筛选方法，是基于双抗体夹心ELISA检测。双抗体ELISA夹心法(Sandwich ELISA)的原理是将特异性抗体（捕获抗体）结合到固相载体上形成固相抗体，然后加入待检样品，捕获抗体与待检样品的的抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体（检测抗体），与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物，加底物显色后，即可判断抗原含量，具有高灵敏度、高专一性，抗原无须事先纯化的优点。但捕获抗体与检测抗体必须精心选取，才可避免交叉反应或竞争相同的抗原结合部位。值得注意的是如果单克隆抗体很少，很可能会找不到可以配对的抗体，因此，在免疫动物的时候，应多免疫几只动物，以获得更多的单克隆抗体，武汉戴安生物配对单抗项目免疫10只Balb/C小鼠进行单抗制备。

服务优势

拥有先进成熟的单克隆抗体技术平台；

经验丰富，人员稳定的技术研发团队；

免疫10只小鼠，提高单抗成功率；

可获得5 ~20个高亲和力细胞株，最终提供1~2组抗体配对；

提供配对的细胞株及细胞株保管服务。

交付内容

a. 配对成功的抗体>=1对，5mg捕获抗体，1mg标记的检测抗体；

b. 配对成功的细胞株；

c. 一定数量的试剂盒成品（可选）；

d. 完整的单克隆抗体制备及抗体配对检测信息项目报告。

流程介绍

抗原制备-单抗制备-抗体配对-产品交付

阶段一：抗原制备

一般公司准备抗原，若客户提供抗原，需10-15mg高纯度蛋白质；

阶段二：单抗制备（1-140天）

0-60天： 持续免疫5只 Balb/c小鼠，间接ELISA测定血清效价，至效价足够高；

60-65天：融合小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞，获得需要的杂交瘤细胞。

65-90天：间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞并做亚克隆，提供10株阳性细胞上清给客户，供客户筛选，所有阳性克隆可保存2周左右。

90-120天：对客户选出的阳性杂交瘤细胞做第二次亚克隆，保证细胞株的纯度和稳定性，如有必要可增加亚克隆次数。对筛选出的阳性杂交瘤的单克隆抗体进行亚型鉴定，扩大培养客户确认的阳性克隆细胞。

120-140天：将扩大培养的阳性杂交瘤细胞制备腹水，并纯化抗体1-2mg。

阶段三：单抗配对（140-180天）

140-150天：对纯化抗体做生物素或过氧化物酶（HRP）标记，然后对标记抗体进行分子筛层析纯化。

150-180天： 用棋盘式夹心ELISA筛选单克隆抗体对。未标记的抗体做为捕获抗体，标记抗体做为检测抗体，分组配对，做ELISA检测。设置合适的阴性对照，加入标准抗原后OD值明显升高的抗体对，即为配对抗体对。

阶段四：产品交付（180-210天）

180-210天：制备以下产品并发货：5mg捕获抗体，1mg标记的检测抗体，2-5株杂交瘤细胞，抗体配对相关数据

TIPS:

1除了单抗对配对抗体，武汉戴安生物还可提供单抗—多抗配对服务，以达到不同多个水平的的检测需求。

2 单抗配对项目的免疫原可由公司制备，也可以由客户提供，具体需求可咨询公司。如需针对天然样本配对需要客户提供样本检测。

单克隆抗体对定制项目周期约6个月左右，武汉戴安生物凭借丰富的单克隆抗体制备经验，已为多所学校和科研院所提供优质的单抗多抗服务，也可以为企业客户提供抗体配对，试剂盒开发服务，具体请咨询公司。