技术原理:
数字PCR( 也可称单分子PCR)包括两部分内容:PCR 扩增和荧光信号分析。在PCR 扩增阶段,与传统技术不同,数字PCR需要将样品稀释到单分子水平,并平均分配到几十至几万个单元中进行反应。不同于qPCR 对每个循环进行实时荧光测定的方法,数字PCR 技术是在扩增结束后对每个反应单元的荧光信号进行采集。最后通过直接计数或泊松分布公式计算得到样品的原始浓度或含量。数字PCR的定量方法不依赖于扩增曲线的循环阈值,因此不受扩增效率的影响,也不必采用看家基因和标准曲线,具有很好的准确度和重现性,可以实现绝对定量分析。在未来十年内,医学保健的目标是提供优质高效的个性化医疗。PCR 方法会在实现这个目标的过程中发挥重要作用。相比于传统的PCR,数字PCR 技术有着无可比拟的优势和广泛的应用前景。
数字PCR检测原理
数字PCR检测流程
应用领域:
a. 突变/稀有变异检测(Mutation/Rare variant detection)
b. 拷贝数变异(Copy-number variation)
c. 进入外周循环(包括血液和粪便)的肿瘤组织核酸分析
d. 无创产前筛查:
e. 转化移植检测。
f. 药理学(Pharmacogenetics)
g. 基因表达分析(Gene ex pression analysis)-特别针对单细胞或少量细胞或者血清血浆样品
h. 线粒体拷贝数分析与线粒体突变分析
i. 数字PCR可以验证二代测序(NGS)