应用：
目的基因表达的差异检测
目的基因表达的亚细胞定位
目的基因表达的相互作用研究
目的基因瞬转/稳转细胞系的蛋白定位研究
实验原理

细胞免疫化学与免疫组织化学实验都是依据抗原抗体反应和化学显色的原理，采用标记的特异性抗体对组织或细胞内抗原的分布进行原位检测技术。细胞免疫化学将培养处理后的细胞爬片、固定、破膜、封闭后，加入一抗与抗原蛋白结合，再加入标记有荧光素的二抗与一抗进行反应，最后通过激光共聚焦扫描显微镜进行荧光拍摄来显示细胞中靶蛋白的表达变化和定位
实验流程

简介：瑞金特生物技术平台可承接单项的蛋白质组学技术服务, 同时平台也开展规模化、高通量的蛋白质组学委托科研服务。服务项目包括样本制备、iTRAQ/SILAC/DIGE/蛋白双向电泳/蛋白N端测序/蛋白表达，免疫组化、蓝色温和胶电泳系统分离蛋白质复合体、图像分析、胶内酶切、蛋白质鉴定、数据库查询与结果分析、免疫印迹及磷酸化蛋白质检测。

样品制备技术

1．适于双向电泳的蛋白质提取及定量。

2．亚细胞器提取及纯度评价（质膜、线粒体、内质网、细胞核、胞浆）。

3．常规HE染色、特殊染色，有10余种特染检查，如网状纤维染色、Mas on染色、弹力纤维、胶原纤维染色等。

4．免疫组织化学检查：有80余种免疫组化检查项目，淋巴瘤系列标记抗体、激素受体、细胞增殖性标记物、癌基因蛋白等。

5．Beckman公司Optima™ L-80 XP超速离心机。

6．Beckman公司Avanti™ J-25高速离心机。

7．德国产徕卡全自动脱水机（ASP200）、包埋机（EG1150）、石蜡切片机（RM2255）。

电泳及电转系统

1. BIO-RAD公司PROTEAN IEF Cell等电聚焦仪。

2. BIO-RAD公司PROTEAN II xi Cell电泳槽。
3．BIO-RAD公司Mini-PROTEAN 3 Electrophoresis Module/Mini Trans-Blot Module。
4．Amersham pharmcia Biotech公司IPGphor等电聚焦仪。
5．Amersham pharmcia Biotech公司Ettan DALT II System。
6．Amersham pharmcia Biotech公司Hoefet miniVE electrophoresis and electrotransfer Unit。

7.图像分析软件BIO-RAD公司PDQuest™ 2-D analysis software version:7.11。
8.图像分析软件Amersham pharmcia Biotech公司Image Master™ 2D version:5.0。
9．自动切胶酶解系统为BIO-RAD公司Spot Cutter；WATERS公司MassPrep。

10．Amersham pharmcia Biotech公司Spot Handling Workstation。

11．Amersham pharmcia Biotech公司SE250垂直电泳系统和梯度混合仪。蛋白质组学中的核心质谱技术

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱MALDI-TOF-MS（WATERS公司）：可测定生物大分子的分子量高达600KDa。通过肽质量指纹谱（PMF）和肽序列标签（PST）技术可高灵敏度、高通量、快速鉴定蛋白质，是蛋白质组学研究必不可少的生物质谱，也是临床蛋白质组学首选的技术。还可分析寡核苷酸序列、多糖结构、聚合物分子量分布、特殊合成化学品等。

1、MALDI-TOF/TOF质谱仪（ABI公司）： 能从一个样品的PMF图谱中直接选择肽段离子进行片断化和MS/MS分析，而且分析可在数秒或数十秒内完成。该仪器是目前进行高灵敏度、高通量的蛋白质组分析非常理想的仪器。
2、 电喷雾四极杆飞行时间串联质谱仪ESI-Q-TOF-MS（WATERS公司）:自动化的LC-MS/MS肽段测序功能，是多肽组学研究的重要技术。样品用量少，仅fmol样品就可测序（如电泳胶）。

3、离子阱串联质谱仪ESI-Ion Trap-MS （Thermo公司）：中心具有两台离子肼串联质谱仪（LCQ； LTQ各一台），高通量LC-MS/MS肽段测序功能，为SHOTGUN技术首选串联质谱。

中心最新引进的Finnigan LTQ-FT线性离子阱回旋共振质谱仪，是目前国际上蛋白质鉴定准确性最高的仪器之一，主要特点1.超高分辨率；2.精确质量数和多级串连质谱分析数据，现已投入使用。

服务流程：
1、 讨论分析实验方案
2、 确定服务内容
3、 签订服务合同
4、 进行实验，定期向客户反馈
5、 整理实验报告
6、 完成合同内容
7、 后续实验服务，进一步合作

简介：

瑞金特生物实验中心引进美国安捷伦公司的液相色谱质谱联用仪。形成了高通量、高灵敏度和高分辨率的规模化蛋白质分析支撑技术体系，为促进蛋白质组学及相关研究的发展，共享先进的技术资源，近年来生物质谱实验室蛋白质/多肽质谱鉴定、生物工程药物结构确证和蛋白质组学多项成熟的分析技术已为国内外客户提供了广泛的服务。

设备仪器：

美国安捷伦公司Agilent （xct-6330） 型号的液相色谱仪，MS为美国热电公司的TSQ型号质谱仪；质谱仪采用ESI（电喷雾电离）离子源，MS/MS 串连四极杆分析器。可在线检测极性有机化合物、核酸、多肽、小分子蛋白质及其化学修饰产品的实际分子量，并对送检样品进行分子量鉴定，纯度及修饰效果分析。

质量范围M/Z 10～2,000 分辨率R=2M

设备应用：

芯片/质谱 (HPLC-Chip/MS) ——显著提高了纳流液-质联用分析结果的灵敏度，可靠性和分析速度 安捷伦推出了世界第一台的基于微流控技术的纳流液相色谱芯片-质谱平台。 这项技术将主要用于蛋白质组学和药物分析方面。其核心是采用可重复使用的聚合物液相色谱芯片取代传统的液相色谱柱。这个平台将多维色谱集成在一块芯片上，采用插拔式设计，操作简单与标准液相色谱/质谱联用仪相比， 它的其灵敏度提高了3,500倍。尽管芯片的体积很小，但是可以容纳最长20 厘米的有C18填料的色谱柱。液相色谱/芯片作为一个模块与安捷伦的所有6000系列液-质联用仪完全兼容。 液相色谱-芯片技术主要应用蛋白质组学研究和药物标靶研究等领域。有关 的应用发表在许多国际知名的杂志上，如Analytical Chemistry; Electrophoresis, PNS上液相色谱芯片产品主要包括七种类型的芯片涵盖大分子和小分子的应用：
* 酶解蛋白质鉴定芯片 #1 * 酶解蛋白质鉴定芯片#2 * 寡聚糖的芯片 * 直接进样芯片
* 小分子芯片 * 质谱校正和诊断芯片 * 全蛋白质分析芯片
测试范围：
多肽、蛋白质的电喷雾质谱分子量测定以及天然产物分子、生物大分子、有机分子的质谱测试和研究

送检样品要求：

样品应尽量不含盐份、离子表面活性剂、去垢剂及一些难挥发性盐。样品送检量、溶解方式以及未知可否做质谱检测的样品可与我们的工作人员联系以便提高检测效率。

（送样单请附带检测样品的品名及精确计算分子量）

送样须知：

A：样品量：50pmol干粉或1ug/uL以上（一般测试）、100pmol干粉或1ug/uL以上（MALDI串联质谱分析）、100ug干粉以上（二硫键分析、糖基化分析，磷酸化分析，其他修饰分析）、10ug干粉以上（SDS-PAGE或IEF）；

B：盐含量：挥发性无机盐，<20mM，请勿使用PBS、SDS和尿素等质谱干扰物质；

C：考马斯亮蓝染色样品可全部接收，银染过程中不得使用戊二醛作为固定剂；

D：请告知样品是否有修饰，并请注明修饰方式。

主要应用 :
* 蛋白质组学研究 * 寡聚糖和糖蛋白的研究 * 小分子化合物分析

* 药物发现和研发 * 食品和环境样品分析

检测报告：

从收到样品起1-2个工作日内可给出样品的检测报告，以电子邮件的形式发给您并附带检测结果分析。包括结果有：

一级质谱：质谱图、肽段分子量、数据库检索结果； 二级质谱：质谱图、肽段分子量、数据库检索结果、肽段氨基酸序列、修饰位点等；

提供基于Ion torrent平台的基因检测服务：

快速准确地得到多个基因，多个样本的基因突变情况， 为疾病的诊断，治疗提供基因水平的参考意见。

。

肿瘤基因靶向测序

a.  Cancer Hotspot Panel V2：靶向50个原癌及抑癌基因，覆盖约2800个已知外显子突变位点，最高4000 X测序深度。

b.  Comprehensive Cancer Panel：靶向409个引用次数最多及突变最频繁的关键原癌及抑癌基因，350 X以上测序深度。

c.  BCRA1/2 Panel：特异性针对乳腺癌/宫颈癌BCRA1/2检测，1000 X以上测序深度。Angelina Jolie通过基因诊断降低乳腺癌发病风险引起全球热议。

d.  Colon and Lung Cancer Panel：特异性靶向结肠癌、肺癌相关22个基因热点区域，1500 X以上的测序深度。

遗传病基因检测:Inherited Disease Panel：涵盖 700多种常见孟德尔遗传病相关的328个基因当基因组位置的测序覆盖度>20x时，生殖细胞系突变检测>90% 神经肌肉疾病涉及237种疾病中88个基因心脏病涉及143种疾病中61个基因发育疾病涉及143种疾病中61个基因代谢疾病涉及44种疾病中28个基因其他典型遗传性疾病涉及196种疾病中75个基因。

定制化靶基因测序:我们还可采用Ion AmpliSeq™ Custom Panel：根据研究兴趣设计并定制目的基因的测序服务，可灵活选择测序深度。目前已经给多个医院客户做过多个大型定制化服务。

1 微生物多样性测序

产品介绍
微生物多样性测序（又称扩增子测序）是利用二/三代测序平台，对16S rDNA/18S rDNA/ITS/功能基因等特定区段PCR产物进行高通量测序，突破传统微生物不可培养的缺点，获得环境样本中的微生物群落结构、进化关系以及微生物与环境相关性等信息。
适用范围
医学领域：常见疾病与人体微生物的关系
动物领域：瘤胃产甲烷菌类群研究等
农业领域：农业耕作等
环境领域：雾霾处理、污水治理、石油降解、酸性矿水处理等
特殊极端环境：气候变化导致的环境变化研究

实验流程：

：

分析流程

技术参数

2. DNA常规测序

测序特色

a.  取样快高效快捷的专业物流，每天两次取样，保证样品第一时间到达实验室。

b.  瑞金特生物测序单序列读长可达800～900bp。

c.  瑞金特生物提供的可靠碱基，质量值均在Q20以上。

d.  操作精专业的技术人员，严格SOP双重质控，样品数据真实可靠。

e.  效率高质粒和已纯化PCR产物，24h出结果，菌和未纯化PCR 产物，36～40h出结果。

a.  不怕难瑞金特生物结合自主研发的试剂及BI dGTP BigDye terminator v3.0等昂贵试剂，能有效解决高GC、发夹结构等难题。

免费服务
根据不同的需求，我们还可以为合作伙伴免费提供：

a.  测序引物设计和评估

b.  序列拼接

c.  DNA序列的基本分析

d.   Primer Walking引物设计

e.   菌液活化

3. EST测序

EST（Expressed Sequence Tag）表达序列标签是指随机从构建的cDNA文库中挑选克隆，并进行5'端和3'端一次性测序所获得的短cDNA部分序列，一般长度为150～500bp。虽然EST只是完整基因的一部分，但是其序列长度已足以代表该基因，因此可以采用EST特异性地标记基因。目前，EST的数目比GenBank中其他核苷酸序列多，所以在EST 库中更容易搜寻到新的基因，它已被广泛地应用于基因的识别。另外，由于EST 来源于特定组织在特定环境下总mRNA所构建的cDNA文库，因此EST也能说明该组织中各基因的表达水平。

EST测序的应用

a.  基因表达谱分析

b.  SSR标记的发掘

c.  作为构建分子标记连锁图谱的探针

生物信息分析

1. 基本信息分析

a.从峰图到序列的转化，去除低质量的序列和载体序列

b.序列拼接

c. EST注释

d. ORF预测及分析

e. 基因注释（NR、NT数据库）

2. 高级信息分析

a.功能蛋白分析

b.Interpro功能域分析

c.序列属性及其对应Unigene的分析

d. COG分析

e. Pathway分析

提供结果

 1. 测序峰图及序列文件

 2. 生物信息分析报告

4.小基因组Shotgun测序

鸟枪战略（Shotgun Strategy）又称随机测序战略，是由美国塞莱拉遗传公司创始人克雷格·文特尔发明，主要针对大片段的全长测序。此策略是将基因组DNA用机械方法随机打断成小片段，并连入合适的载体构建亚克隆文库，从中随机挑取克隆测序，再通过生物信息学方法对测得的序列进行拼接组装以获得大片段DNA的序列。

构建不同插入片段大小的Shotgun文库（1.5～3 Kb、4～6 Kb、6～8 Kb等），可减少因基因组中的重复序列造成的错误拼装，提供更多Contigs之间的关联信息。Shotgun策略已广泛应用于包括基因组、叶绿体、线粒体、野生质粒、噬菌体、病毒以及Fosmid/Cosmid/BAC克隆等的全长测序。

优势

a.  成熟的Shotgun文库构建体系，确保您在最短时间拿到数据
我们曾创造了10个工作日完成40 Kb Fosmid全长测序的记录。

b.  专业的生物信息团队:能提供可靠精准的序列拼接结果，8～10倍覆盖率，phred-20质量标准，全长准确率大于99.99%，并可提供专业的生物信息分析。

c.  丰富的实战经验:目前已成功完成了包括链霉菌、水稻、番茄、扬子鳄、熊猫、朱鹮等物种的Fosmid/BAC克隆全长测序1000余例，小鼠、蚯蚓、油菜花、大豆等物种的线粒体100余例，大肠杆菌的野生质粒、噬菌体、病毒等全长测序20余例。我们所提供的全长序列已被众多实验室用于发表学术论文。

提供结果

完整的实验报告（包含实验细节、质控点、数据拼接记录和完整序列）。
收费标准

简介：

随着后基因组时代的到来，蛋白质组学得到了空前的发展，蛋白质组研究旨在揭示基因表达的真正执行生命活动的全部蛋白质的表达规律和生物功能。包括蛋白质组、蛋白质组学、功能蛋白质组学和结构基因组学等新的概念的提出，蛋白质组学已成为当今生物领域中极其活跃的学科。（Two Dimensional Electrophoresis ，2DE) 是蛋白质组研究的三大关键核心技术之一。双向电泳由于具有高分辨率和高灵敏度已成为分析复杂蛋白混合物的基本工具。

原理：2DE 的第一向电泳是等电聚焦电泳(Iso-Electric Focusing ，IEF) ，然后通过十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 对蛋白质进行第二向电泳；在IEF 中，蛋白质因等电点不同而被分离，在SDS-PAGE 中，不同分子量的蛋白质相互间被分离开，再用考马斯亮兰或银染进行检测，经Pdquest 等软件对结果进行比对、解析。

蛋白双向电泳实验服务价目表与相关说明：

说明:

1.本表所列的样品指可用常规方法处理的样品，如样品较特殊（富含核酸，盐分，脂类，色素，多糖等影响双向电泳而需去除的的杂质或需浓缩样品），价格将视进一步处理的方法，根据相应费用另行商定。

2.为了达到好的实验效果，客户所送样品，都要经过我们的样品制备和双向电泳预实验，以确保客户项目能顺利进行。

3.用于一次制备型（考马斯亮蓝染色，用于后续质谱分析）双向电泳的样品，动物组织、细胞或细菌的样品量湿重不少于100mg；植物或真菌样品量湿重不少于2g；富含杂质或蛋白质含量低的样品量湿重不少于3g；如直接提供蛋白质提取物，浓度不少于4mg/ml，总量不少于5mg。

一、样品制备

二、双向电泳

等电聚焦（IEF）

胶条平衡

染色:考染 ;银染

扫描 

简介：

瑞金特生物合成多肽采用逐步固相合成方法服务，利用微波技术处理反应体系，可以合成较长的复杂多肽。多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，多肽的一个末端固定在特殊支持物上，通过循环步骤最终形成一条完整的多肽。

肽链的设计：

多肽是复杂的大分子，每条序列在物理和化学特性上都是独特的，研究人员设计多肽时应考虑到合成，纯化以及溶解等过程中的难度，从而能够使用该多肽达到自己的实验目的。以下是设计过程中的一些建议：如何降低肽链合成的难度：

 •减少序列长度

 •减少疏水性残基数

 •减少困难残基

如何增强肽链的可溶性：

 •改变N端或C端

 •缩短或加长序列

 •加入可溶性残基

 •通过置换一个或多个残基改变序列

 •通过选用不同框架来改变序列

多肽保存：

 •冻干多肽可在-20度保存或室温保存 

 •溶液肽远比冻干形式不稳定，溶液应为中性PH（5-7）-20度保存。 

 •为避免样品的反复冻融，最好分成小样存放。

多肽的溶解：

大多数多肽的首选溶剂是超纯抽气水，稀乙酸或氨水分别对碱性或酸性多肽的溶解也有帮助。如果这些方法用过后还不溶解的多肽，建议用DMF，脲，guanidiniam,chloride,acetonitnle来溶解。

多肽的用途：

主要用于抗体的制备，多肽疫苗，多肽微注射剂对基因结构与功能关系的研究。本中心提供不同纯度的多肽，多粗提产物到98%的医药级别，客户可根据需求进行选择。

＞80% ：免疫学应用，多克隆抗体制备

＞90%：SAR研究，生物测定

＞95%：NMR，结晶化，体外生物测定

＞98%：NMR，结晶化，敏感的生物测定

服务范围：

a.  普通线性肽，链长至189个氨基酸，毫克至克级，纯度可达99%

b.  简单修饰肽：免费提供N端乙酰化，末端酰胺化

c.  复杂修饰肽：脂肽，磷酸肽（Ser、Thr、Tyr），环肽（酰胺环、二硫键环），荧光标记肽（FAM、FITC），生物素标记肽（BIOTIN）、复合抗原肽（MAP）等 ┄

d.  蛋白交联：KLH，BSA，OVA

e.  含特殊氨基酸肽：含有D型氨基酸及各种氨基酸衍生物

f.  不同纯度范围（粗肽、＞70%、＞80%、＞90%、＞95%、＞98%、＞99%）

简介：

瑞金特生物合成多肽采用逐步固相合成方法服务，利用微波技术处理反应体系，可以合成较长的复杂多肽。多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，多肽的一个末端固定在特殊支持物上，通过循环步骤最终形成一条完整的多肽。

肽链的设计：

多肽是复杂的大分子，每条序列在物理和化学特性上都是独特的，研究人员设计多肽时应考虑到合成，纯化以及溶解等过程中的难度，从而能够使用该多肽达到自己的实验目的。以下是设计过程中的一些建议：如何降低肽链合成的难度：

 •减少序列长度

 •减少疏水性残基数

 •减少困难残基

如何增强肽链的可溶性：

 •改变N端或C端

 •缩短或加长序列

 •加入可溶性残基

 •通过置换一个或多个残基改变序列

 •通过选用不同框架来改变序列

多肽保存：

 •冻干多肽可在-20度保存或室温保存 

 •溶液肽远比冻干形式不稳定，溶液应为中性PH（5-7）-20度保存。 

 •为避免样品的反复冻融，最好分成小样存放。

多肽的溶解：

大多数多肽的首选溶剂是超纯抽气水，稀乙酸或氨水分别对碱性或酸性多肽的溶解也有帮助。如果这些方法用过后还不溶解的多肽，建议用DMF，脲，guanidiniam,chloride,acetonitnle来溶解。

多肽的用途：

主要用于抗体的制备，多肽疫苗，多肽微注射剂对基因结构与功能关系的研究。本中心提供不同纯度的多肽，多粗提产物到98%的医药级别，客户可根据需求进行选择。

＞80% ：免疫学应用，多克隆抗体制备

＞90%：SAR研究，生物测定

＞95%：NMR，结晶化，体外生物测定

＞98%：NMR，结晶化，敏感的生物测定

服务范围：

a.  普通线性肽，链长至189个氨基酸，毫克至克级，纯度可达99%

b.  简单修饰肽：免费提供N端乙酰化，末端酰胺化

c.  复杂修饰肽：脂肽，磷酸肽（Ser、Thr、Tyr），环肽（酰胺环、二硫键环），荧光标记肽（FAM、FITC），生物素标记肽（BIOTIN）、复合抗原肽（MAP）等 ┄

d.  蛋白交联：KLH，BSA，OVA

e.  含特殊氨基酸肽：含有D型氨基酸及各种氨基酸衍生物

f.  不同纯度范围（粗肽、＞70%、＞80%、＞90%、＞95%、＞98%、＞99%）

实验原理

早期的shRNA载体多采用RNA聚合酶III型启动子介导shRNA的表达，RNA聚合酶III型启动子如鼠源的U6启动子和人源的H1启动子可以在哺乳动物细胞中表达小分子RNA。随着miRNA干扰机制的深入研究，发展出第二代shRNA载体，即采用RNA聚合酶II型启动子CMV表达含侧翼序列的miRNA模拟物。该载体模拟miRNA的加工，表达出来的shRNA进入RISC沉默复合物的效率要比RNA聚合酶III型启动子表达的shRNA高数十倍，抑制效率更好，且可以和EGFP协同表达，方便观察转染效率。

实验流程

实验原理

基因的化学合成即人工合成寡核甘酸片段，通过PCR拼接的方法，获得所需要的基因表达序列或者启动子等功能性元件片段。基因化学合成使合成任何基因序列成为可能。

实验流程

实验原理

miRNA是在真核生物中发现的具有调控功能的内源性非编码RNA，大小约20~25个核苷酸。我们根据成熟miRNA序列信息，合成含有茎环结构的前体miRNA连接至含侧翼序列的表达载体中，将其转染/病毒包装感染进入细胞后，由II型启动子（CMV）启动表达，经核酸酶的剪切加工，组装RNA诱导的沉默复合体，通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA，并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。
实验流程