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瑞金特生物实验中心是一家从事基础医学科学研究、药物开发和实验技术推广服务的专业机构,是最先利用药物研发的实验平台承接广大医生的临床前研究课题或制药企业的研发外包服务型机构。 实验技术服务平台有:基因工程平台、蛋白组学实验平台、代谢组学实验平台、细胞免疫学平台、光谱色谱质谱分析平台、动物实验和疾病动物模型的定制平台、药理病理毒理学检测实验服务平台等     瑞金特生物实验中心主要为广大医生及制药企业等基础医学研究者提供临床前的项目立项,课题设计(包括文献搜索、查阅,分析实验思路的合理性,证明所需要的方法和检测所需的指标),实验流程的框架优化,实验部分的操作,数据整理分析及后续工作。义务提供的服务包括:无偿提供实验框架的优化;无偿及时的提供文章的辅助发表工作;无偿提供我们给出后续研究的方向及建议;无偿提供技术专利成果的转化服务。

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应用:目的基因表达的差异检测目的基因表达的亚细胞定位目的基因表达的相互作用研究目的基因瞬转/稳转细胞系的蛋白定位研究实验原理细胞免疫化学与免疫组织化学实验都是依据抗原抗体反应和化学显色的原理,采用标记的特异性抗体对组织或细胞内抗原的分布进行原位检测技术。细胞免疫化学将培养处理后的细胞爬片、固定、破膜、封闭后,加入一抗与抗原蛋白结合,再加入标记有荧光素的二抗与一抗进行反应,最后通过激光共聚焦扫描显微镜进行荧光拍摄来显示细胞中靶蛋白的表达变化和定位实验流程

简介:瑞金特生物技术平台可承接单项的蛋白质组学技术服务, 同时平台也开展规模化、高通量的蛋白质组学委托科研服务。服务项目包括样本制备、iTRAQ/SILAC/DIGE/蛋白双向电泳/蛋白N端测序/蛋白表达,免疫组化、蓝色温和胶电泳系统分离蛋白质复合体、图像分析、胶内酶切、蛋白质鉴定、数据库查询与结果分析、免疫印迹及磷酸化蛋白质检测。样品制备技术1.适于双向电泳的蛋白质提取及定量。2.亚细胞器提取及纯度评价(质膜、线粒体、内质网、细胞核、胞浆)。3.常规HE染色、特殊染色,有10余种特染检查,如网状纤维染色、Mas on染色、弹力纤维、胶原纤维染色等。4.免疫组织化学检查:有80余种免疫组化检查项目,淋巴瘤系列标记抗体、激素受体、细胞增殖性标记物、癌基因蛋白等。5.Beckman公司Optima™ L-80 XP超速离心机。6.Beckman公司Avanti™ J-25高速离心机。7.德国产徕卡全自动脱水机(ASP200)、包埋机(EG1150)、石蜡切片机(RM2255)。电泳及电转系统1. BIO-RAD公司PROTEAN IEF Cell等电聚焦仪。2. BIO-RAD公司PROTEAN II xi Cell电泳槽。3.BIO-RAD公司Mini-PROTEAN 3 Electrophoresis Module/Mini Trans-Blot Module。4.Amersham pharmcia Biotech公司IPGphor等电聚焦仪。5.Amersham pharmcia Biotech公司Ettan DALT II System。6.Amersham pharmcia Biotech公司Hoefet miniVE electrophoresis and electrotransfer Unit。7.图像分析软件BIO-RAD公司PDQuest™ 2-D analysis software version:7.11。8.图像分析软件Amersham pharmcia Biotech公司Image Master™ 2D version:5.0。9.自动切胶酶解系统为BIO-RAD公司Spot Cutter;WATERS公司MassPrep。10.Amersham pharmcia Biotech公司Spot Handling Workstation。11.Amersham pharmcia Biotech公司SE250垂直电泳系统和梯度混合仪。蛋白质组学中的核心质谱技术基质辅助激光解析电离飞行时间质谱MALDI-TOF-MS(WATERS公司):可测定生物大分子的分子量高达600KDa。通过肽质量指纹谱(PMF)和肽序列标签(PST)技术可高灵敏度、高通量、快速鉴定蛋白质,是蛋白质组学研究必不可少的生物质谱,也是临床蛋白质组学首选的技术。还可分析寡核苷酸序列、多糖结构、聚合物分子量分布、特殊合成化学品等。1、MALDI-TOF/TOF质谱仪(ABI公司): 能从一个样品的PMF图谱中直接选择肽段离子进行片断化和MS/MS分析,而且分析可在数秒或数十秒内完成。该仪器是目前进行高灵敏度、高通量的蛋白质组分析非常理想的仪器。2、 电喷雾四极杆飞行时间串联质谱仪ESI-Q-TOF-MS(WATERS公司):自动化的LC-MS/MS肽段测序功能,是多肽组学研究的重要技术。样品用量少,仅fmol样品就可测序(如电泳胶)。3、离子阱串联质谱仪ESI-Ion Trap-MS (Thermo公司):中心具有两台离子肼串联质谱仪(LCQ; LTQ各一台),高通量LC-MS/MS肽段测序功能,为SHOTGUN技术首选串联质谱。中心最新引进的Finnigan LTQ-FT线性离子阱回旋共振质谱仪,是目前国际上蛋白质鉴定准确性最高的仪器之一,主要特点1.超高分辨率;2.精确质量数和多级串连质谱分析数据,现已投入使用。服务流程:1、 讨论分析实验方案2、 确定服务内容3、 签订服务合同4、 进行实验,定期向客户反馈5、 整理实验报告6、 完成合同内容7、 后续实验服务,进一步合作

简介:瑞金特生物实验中心引进美国安捷伦公司的液相色谱质谱联用仪。形成了高通量、高灵敏度和高分辨率的规模化蛋白质分析支撑技术体系,为促进蛋白质组学及相关研究的发展,共享先进的技术资源,近年来生物质谱实验室蛋白质/多肽质谱鉴定、生物工程药物结构确证和蛋白质组学多项成熟的分析技术已为国内外客户提供了广泛的服务。设备仪器:美国安捷伦公司Agilent (xct-6330) 型号的液相色谱仪,MS为美国热电公司的TSQ型号质谱仪;质谱仪采用ESI(电喷雾电离)离子源,MS/MS 串连四极杆分析器。可在线检测极性有机化合物、核酸、多肽、小分子蛋白质及其化学修饰产品的实际分子量,并对送检样品进行分子量鉴定,纯度及修饰效果分析。质量范围M/Z 10~2,000 分辨率R=2M设备应用:芯片/质谱 (HPLC-Chip/MS) ——显著提高了纳流液-质联用分析结果的灵敏度,可靠性和分析速度 安捷伦推出了世界第一台的基于微流控技术的纳流液相色谱芯片-质谱平台。 这项技术将主要用于蛋白质组学和药物分析方面。其核心是采用可重复使用的聚合物液相色谱芯片取代传统的液相色谱柱。这个平台将多维色谱集成在一块芯片上,采用插拔式设计,操作简单与标准液相色谱/质谱联用仪相比, 它的其灵敏度提高了3,500倍。尽管芯片的体积很小,但是可以容纳最长20 厘米的有C18填料的色谱柱。液相色谱/芯片作为一个模块与安捷伦的所有6000系列液-质联用仪完全兼容。 液相色谱-芯片技术主要应用蛋白质组学研究和药物标靶研究等领域。有关 的应用发表在许多国际知名的杂志上,如Analytical Chemistry; Electrophoresis, PNS上液相色谱芯片产品主要包括七种类型的芯片涵盖大分子和小分子的应用:* 酶解蛋白质鉴定芯片 #1 * 酶解蛋白质鉴定芯片#2 * 寡聚糖的芯片 * 直接进样芯片* 小分子芯片 * 质谱校正和诊断芯片 * 全蛋白质分析芯片测试范围:多肽、蛋白质的电喷雾质谱分子量测定以及天然产物分子、生物大分子、有机分子的质谱测试和研究送检样品要求:样品应尽量不含盐份、离子表面活性剂、去垢剂及一些难挥发性盐。样品送检量、溶解方式以及未知可否做质谱检测的样品可与我们的工作人员联系以便提高检测效率。(送样单请附带检测样品的品名及精确计算分子量)送样须知:A:样品量:50pmol干粉或1ug/uL以上(一般测试)、100pmol干粉或1ug/uL以上(MALDI串联质谱分析)、100ug干粉以上(二硫键分析、糖基化分析,磷酸化分析,其他修饰分析)、10ug干粉以上(SDS-PAGE或IEF);B:盐含量:挥发性无机盐,<20mM,请勿使用PBS、SDS和尿素等质谱干扰物质;C:考马斯亮蓝染色样品可全部接收,银染过程中不得使用戊二醛作为固定剂;D:请告知样品是否有修饰,并请注明修饰方式。主要应用 :* 蛋白质组学研究 * 寡聚糖和糖蛋白的研究 * 小分子化合物分析* 药物发现和研发 * 食品和环境样品分析检测报告:从收到样品起1-2个工作日内可给出样品的检测报告,以电子邮件的形式发给您并附带检测结果分析。包括结果有:一级质谱:质谱图、肽段分子量、数据库检索结果; 二级质谱:质谱图、肽段分子量、数据库检索结果、肽段氨基酸序列、修饰位点等;

简介:随着后基因组时代的到来,蛋白质组学得到了空前的发展,蛋白质组研究旨在揭示基因表达的真正执行生命活动的全部蛋白质的表达规律和生物功能。包括蛋白质组、蛋白质组学、功能蛋白质组学和结构基因组学等新的概念的提出,蛋白质组学已成为当今生物领域中极其活跃的学科。(Two Dimensional Electrophoresis ,2DE) 是蛋白质组研究的三大关键核心技术之一。双向电泳由于具有高分辨率和高灵敏度已成为分析复杂蛋白混合物的基本工具。原理:2DE 的第一向电泳是等电聚焦电泳(Iso-Electric Focusing ,IEF) ,然后通过十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 对蛋白质进行第二向电泳;在IEF 中,蛋白质因等电点不同而被分离,在SDS-PAGE 中,不同分子量的蛋白质相互间被分离开,再用考马斯亮兰或银染进行检测,经Pdquest 等软件对结果进行比对、解析。蛋白双向电泳实验服务价目表与相关说明:说明:1.本表所列的样品指可用常规方法处理的样品,如样品较特殊(富含核酸,盐分,脂类,色素,多糖等影响双向电泳而需去除的的杂质或需浓缩样品),价格将视进一步处理的方法,根据相应费用另行商定。2.为了达到好的实验效果,客户所送样品,都要经过我们的样品制备和双向电泳预实验,以确保客户项目能顺利进行。3.用于一次制备型(考马斯亮蓝染色,用于后续质谱分析)双向电泳的样品,动物组织、细胞或细菌的样品量湿重不少于100mg;植物或真菌样品量湿重不少于2g;富含杂质或蛋白质含量低的样品量湿重不少于3g;如直接提供蛋白质提取物,浓度不少于4mg/ml,总量不少于5mg。一、样品制备二、双向电泳等电聚焦(IEF)胶条平衡染色:考染 ;银染扫描 

简介:瑞金特生物合成多肽采用逐步固相合成方法服务,利用微波技术处理反应体系,可以合成较长的复杂多肽。多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程,多肽的一个末端固定在特殊支持物上,通过循环步骤最终形成一条完整的多肽。肽链的设计:多肽是复杂的大分子,每条序列在物理和化学特性上都是独特的,研究人员设计多肽时应考虑到合成,纯化以及溶解等过程中的难度,从而能够使用该多肽达到自己的实验目的。以下是设计过程中的一些建议:如何降低肽链合成的难度: •减少序列长度 •减少疏水性残基数 •减少困难残基如何增强肽链的可溶性: •改变N端或C端 •缩短或加长序列 •加入可溶性残基 •通过置换一个或多个残基改变序列 •通过选用不同框架来改变序列多肽保存: •冻干多肽可在-20度保存或室温保存  •溶液肽远比冻干形式不稳定,溶液应为中性PH(5-7)-20度保存。  •为避免样品的反复冻融,最好分成小样存放。多肽的溶解:大多数多肽的首选溶剂是超纯抽气水,稀乙酸或氨水分别对碱性或酸性多肽的溶解也有帮助。如果这些方法用过后还不溶解的多肽,建议用DMF,脲,guanidiniam,chloride,acetonitnle来溶解。多肽的用途:主要用于抗体的制备,多肽疫苗,多肽微注射剂对基因结构与功能关系的研究。本中心提供不同纯度的多肽,多粗提产物到98%的医药级别,客户可根据需求进行选择。>80% :免疫学应用,多克隆抗体制备>90%:SAR研究,生物测定>95%:NMR,结晶化,体外生物测定>98%:NMR,结晶化,敏感的生物测定服务范围:a.  普通线性肽,链长至189个氨基酸,毫克至克级,纯度可达99%b.  简单修饰肽:免费提供N端乙酰化,末端酰胺化c.  复杂修饰肽:脂肽,磷酸肽(Ser、Thr、Tyr),环肽(酰胺环、二硫键环),荧光标记肽(FAM、FITC),生物素标记肽(BIOTIN)、复合抗原肽(MAP)等 ┄d.  蛋白交联:KLH,BSA,OVAe.  含特殊氨基酸肽:含有D型氨基酸及各种氨基酸衍生物f.  不同纯度范围(粗肽、>70%、>80%、>90%、>95%、>98%、>99%)

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简介:瑞金特生物合成多肽采用逐步固相合成方法服务,利用微波技术处理反应体系,可以合成较长的复杂多肽。多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程,多肽的一个末端固定在特殊支持物上,通过循环步骤最终形成一条完整的多肽。肽链的设计:多肽是复杂的大分子,每条序列在物理和化学特性上都是独特的,研究人员设计多肽时应考虑到合成,纯化以及溶解等过程中的难度,从而能够使用该多肽达到自己的实验目的。以下是设计过程中的一些建议:如何降低肽链合成的难度: •减少序列长度 •减少疏水性残基数 •减少困难残基如何增强肽链的可溶性: •改变N端或C端 •缩短或加长序列 •加入可溶性残基 •通过置换一个或多个残基改变序列 •通过选用不同框架来改变序列多肽保存: •冻干多肽可在-20度保存或室温保存  •溶液肽远比冻干形式不稳定,溶液应为中性PH(5-7)-20度保存。  •为避免样品的反复冻融,最好分成小样存放。多肽的溶解:大多数多肽的首选溶剂是超纯抽气水,稀乙酸或氨水分别对碱性或酸性多肽的溶解也有帮助。如果这些方法用过后还不溶解的多肽,建议用DMF,脲,guanidiniam,chloride,acetonitnle来溶解。多肽的用途:主要用于抗体的制备,多肽疫苗,多肽微注射剂对基因结构与功能关系的研究。本中心提供不同纯度的多肽,多粗提产物到98%的医药级别,客户可根据需求进行选择。>80% :免疫学应用,多克隆抗体制备>90%:SAR研究,生物测定>95%:NMR,结晶化,体外生物测定>98%:NMR,结晶化,敏感的生物测定服务范围:a.  普通线性肽,链长至189个氨基酸,毫克至克级,纯度可达99%b.  简单修饰肽:免费提供N端乙酰化,末端酰胺化c.  复杂修饰肽:脂肽,磷酸肽(Ser、Thr、Tyr),环肽(酰胺环、二硫键环),荧光标记肽(FAM、FITC),生物素标记肽(BIOTIN)、复合抗原肽(MAP)等 ┄d.  蛋白交联:KLH,BSA,OVAe.  含特殊氨基酸肽:含有D型氨基酸及各种氨基酸衍生物f.  不同纯度范围(粗肽、>70%、>80%、>90%、>95%、>98%、>99%)

简介:瑞金特生物合成多肽采用逐步固相合成方法服务,利用微波技术处理反应体系,可以合成较长的复杂多肽。多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程,多肽的一个末端固定在特殊支持物上,通过循环步骤最终形成一条完整的多肽。肽链的设计:多肽是复杂的大分子,每条序列在物理和化学特性上都是独特的,研究人员设计多肽时应考虑到合成,纯化以及溶解等过程中的难度,从而能够使用该多肽达到自己的实验目的。以下是设计过程中的一些建议:如何降低肽链合成的难度: •减少序列长度 •减少疏水性残基数 •减少困难残基如何增强肽链的可溶性: •改变N端或C端 •缩短或加长序列 •加入可溶性残基 •通过置换一个或多个残基改变序列 •通过选用不同框架来改变序列多肽保存: •冻干多肽可在-20度保存或室温保存  •溶液肽远比冻干形式不稳定,溶液应为中性PH(5-7)-20度保存。  •为避免样品的反复冻融,最好分成小样存放。多肽的溶解:大多数多肽的首选溶剂是超纯抽气水,稀乙酸或氨水分别对碱性或酸性多肽的溶解也有帮助。如果这些方法用过后还不溶解的多肽,建议用DMF,脲,guanidiniam,chloride,acetonitnle来溶解。多肽的用途:主要用于抗体的制备,多肽疫苗,多肽微注射剂对基因结构与功能关系的研究。本中心提供不同纯度的多肽,多粗提产物到98%的医药级别,客户可根据需求进行选择。>80% :免疫学应用,多克隆抗体制备>90%:SAR研究,生物测定>95%:NMR,结晶化,体外生物测定>98%:NMR,结晶化,敏感的生物测定服务范围:a.  普通线性肽,链长至189个氨基酸,毫克至克级,纯度可达99%b.  简单修饰肽:免费提供N端乙酰化,末端酰胺化c.  复杂修饰肽:脂肽,磷酸肽(Ser、Thr、Tyr),环肽(酰胺环、二硫键环),荧光标记肽(FAM、FITC),生物素标记肽(BIOTIN)、复合抗原肽(MAP)等 ┄d.  蛋白交联:KLH,BSA,OVAe.  含特殊氨基酸肽:含有D型氨基酸及各种氨基酸衍生物f.  不同纯度范围(粗肽、>70%、>80%、>90%、>95%、>98%、>99%)

实验原理早期的shRNA载体多采用RNA聚合酶III型启动子介导shRNA的表达,RNA聚合酶III型启动子如鼠源的U6启动子和人源的H1启动子可以在哺乳动物细胞中表达小分子RNA。随着miRNA干扰机制的深入研究,发展出第二代shRNA载体,即采用RNA聚合酶II型启动子CMV表达含侧翼序列的miRNA模拟物。该载体模拟miRNA的加工,表达出来的shRNA进入RISC沉默复合物的效率要比RNA聚合酶III型启动子表达的shRNA高数十倍,抑制效率更好,且可以和EGFP协同表达,方便观察转染效率。实验流程

实验原理基因的化学合成即人工合成寡核甘酸片段,通过PCR拼接的方法,获得所需要的基因表达序列或者启动子等功能性元件片段。基因化学合成使合成任何基因序列成为可能。实验流程

实验原理miRNA是在真核生物中发现的具有调控功能的内源性非编码RNA,大小约20~25个核苷酸。我们根据成熟miRNA序列信息,合成含有茎环结构的前体miRNA连接至含侧翼序列的表达载体中,将其转染/病毒包装感染进入细胞后,由II型启动子(CMV)启动表达,经核酸酶的剪切加工,组装RNA诱导的沉默复合体,通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA,并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。实验流程