外泌体分离纯化仪

 一、 仪器功能介绍

BiWriter 外泌体分离纯化仪集成度高：

1、集成自动化臭氧灭菌功能，实现自动化灭菌；

2、集成制冷功能，保持外泌体活性；

3、先进的传感器与操控系统结合，具备自适应过滤压力调控功能，维持高效的外泌体切向流过滤；

4、自动样品回收功能，一键操控浓缩后外泌体的回收；

5、过滤效率高，1H 内完成 500mL 细胞上清液的 20 倍外泌体浓缩富集，

4L 内完成 2L 细胞上清的 10 倍外泌体浓缩富集。二、 仪器使用介绍

外泌体分离纯化仪自带制冷功能，在仪器开机后通过对过滤板直接制冷，带动整个管路内部的自动降温。该制冷功能的主要目的为保护脆弱外泌体，避免外界环境与仪器过滤过程做功导致的温度上升。

1、  膜装载

1.1 、如上图所示，逆时针旋转仪器上部的两个手轮，将过滤隔板抬升。

1.2 、将超滤膜光滑面朝下，从过滤隔板的左侧装入过滤隔板下层（需要保证滤膜与隔板壁留有一定的缝隙，否者压紧后由于膜的重叠作用导致过滤隔板上下层不能有效贴合）。

1.3 、顺时针旋转两个手轮（需交叉或同时旋钮两个手轮，保证上滤板前后同时下降）至上过滤隔板卡入下过滤隔板凹槽内。用力反复旋钮 2 个手轮，至手轮不能用力拧动为止（建议在拧不动后，用仪器配备的长杆卡入手轮并再次拧紧）。

2、 管路连接

如上图所示，将回流与样品回收的（1、2）管路连接至射流器，滤过液(3)管路连接至射流器，进液（4）管路连接至载样瓶，射流器回流口（5）连接到废液缸。

3、 膜清洗

3.1 、如上图红框部分所示，选择要清洗的液体总量（如 300ml，500ml）。

3.2 、在灭菌瓶中加入超过清洗量的去离子水（或瓶装娃哈哈纯净水），并将灭菌瓶放在屏幕后的载物台上。

3.3 、点击红框部分的“START”按键，启动仪器的膜与管路清洗功能。

3.4 、清洗完毕后，界面会显示清洗完毕提示即表示已经完成清洗。

4、 过滤前仪器的自动化灭菌

4.1 、灭菌瓶中装入 500ml 的去离子水（或瓶装娃哈哈纯净水），瓶盖不得拧紧，保证可将瓶内的气体排��（灭菌时会产生臭氧）。

4.2 、为保证管路连接处的无菌，可在灭菌前，将 1，2，3，4，5 号管路接口喷上 3%过氧化氢，进行连接处的灭菌。

5.1 、点击屏幕右上角的蓝色按键，切换屏幕至过“RUN SETTING”液面，直接点击“START”按键，进行压力测试。

5.2 、运行仪器 5min，期间观察是否有液体从过滤隔板渗��。如有液体渗��，则反复拧紧 2 个手轮，至液体不再渗��。

5.3 、点击“STOP”按键，结束压力测试。通过点击 2 次右上角的切屏按键，跳转回“Filter LOADING”页面。将 5 号管连接至废液瓶，并点击 “PUMP”按键将臭氧水排空。

6、 外泌体浓缩与回收

6.1 、点击屏幕右上角的切屏按键，将屏幕切换至“RUN SETTING”页面。

6.2 、将经过高压灭菌的样品瓶取��，将 4 号管与样品瓶的进液口连接，1 号管与样品瓶的回流口连接，2 号管与收集瓶连接，3 号口与滤过液收集瓶连接（样品瓶、收集瓶、滤过液瓶瓶盖不得旋死，保证常压状态）。注：样品瓶必需放在屏幕后的载物台上，系统在浓缩过程中才能感应液体变化，并依据设定的参数自动结束浓缩过程。

6.3 、将经过 0.22μm 滤膜过滤除去细胞碎片的细胞培养液加入样品瓶中。设置相应的参数：选择好样品的体积，浓缩倍数，及过滤压力。点击“START”按键，开始外泌体浓缩。

6.4 、浓缩过程中“RUN SETTING”页面的下半部分会实时更新并显示参数。其中压力、速度、滤��体积每隔 1S 更新一次，图表每隔 10S 更新一次。

6.5 、备注：A、另外一种接法为 1 号管保持原样，将样品瓶与 5 号管连接（此时 6 号管可以吸入经过 0.22μm 过滤的空气，补充样品瓶因滤��导致的瓶内压力损失。）B、如仅收集滤��液，可保持 1，2 好管原连接不动，5 号管连接至样品瓶，3 号连接至滤过液瓶。

6.6 、浓缩结束后页面会自动提示浓缩结束。此时如需要对浓缩的外泌体进行纯化，可加入 0.6 倍体积的生理盐水到样品瓶中，设定相应的参数，点击“START”按键进行纯化，去除多余的蛋白。

6.7 、重复上述 6.6 过程，即完成全部的纯化步骤。

7、 样品回收

7.1 、点击屏幕右上角的切换按键进行屏幕切换，切换至“COLLECTION”页面。并确认样品瓶放置在载物台上。

7.2 、点击“PUMP OUT”按键，进行样品回收。

7.3 、系统自动会自动确认将样品泵至收集瓶，并结束样品回收程序。

7.4 、如果由于样品瓶中液面低于管路，导致的样品瓶中部分浓缩液残留。可用物体对样品瓶进行单侧垫高，令液面高于进液管路，再次点击“PUMP OUT”按键。

7.5 、重复 7.4 直至样品完全回收入收集瓶。

7.6 、注：如果收集滤过液，则不需要执行此样品回收程序。

8、 样品回收后管路清洗

8.1 、将两个手轮逆时针旋转，将过滤板上部抬升，而后取��滤膜丢弃。

8.2 、顺时针旋转手轮，将滤板压合，旋紧手轮。

8.3 、在“COLLECTION”页面，选择清洗的液体量，将各个管口归位至初始的位置（即与射流器连接位置），将去离子水放置在载物台上，连接 4 号管口与去离子水，5 号口连接废液缸。

8.4 、选择清洗量，点按“START”按键开始清洗，清洗完毕后，程序自动结束并显示清洗完成。

9、 样品回收后管路灭菌

9.1 、在“COLLECTION”页面选择灭菌时长，并点按“START”按键开始灭菌。

9.2 、灭菌结束后在主机的左侧前部有开关按钮，按压按钮后关闭主机

（保护主机的制冷模块，该模块与主机同时开启与关闭）。

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