笃玛 鸡生长激素诱导跨膜蛋白(GHITM) ELISA 试剂盒 产品信息
操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
500ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
250ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
125ng/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
62.5ng/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
31.25ng/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍(48T的20倍)浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
笃玛 鸡生长激素诱导跨膜蛋白(GHITM) ELISA 试剂盒 产品信息
操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
笃玛 鸡生长激素诱导跨膜蛋白(GHITM) ELISA 试剂盒 产品信息
ELISA 实验步骤:
1.包被抗原:稀释液pH 9.6 碳酸盐缓冲液,多肽浓度2ug/ml,0.1ml/孔,4oC过夜,洗净。
2.1%BSA (pH 9.6 碳酸盐缓冲液) 封闭,0.1ml/孔,37oC1h,洗净。
3.稀释抗血清(可稀释不同浓度) 0.1ml/孔,37oC 30分钟,洗净。
4.稀释辣根过氧化物每标记的二抗0.1ml/孔,37oC 40分钟,洗净。
5.显色:TMB显色
A液:四甲基联苯胺10mg 溶于DMF1ml中,再用pH5.0柠檬酸缓冲液稀释100倍.
B液:5ul双氧水加蒸馏水12.5ml 。
终止液:2N硫酸
A液、B液各一滴,比光显色10分钟,终止液一滴。
6.450nm 波长测OD值