细胞冻存液 NobleRyder C0050

　　北京诺博莱德科技有限公司供应细胞冻存液 NobleRyder C0050;现货供应细胞冻存液 NobleRyder C0050量大优惠 　　此细胞冻存液主要是由血清和DMSO组成，适合于大多数细胞的冻存，其冻存方法与常规方法相同。 　　细胞的冻存和复苏 　　一、原理 　　在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在-130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。 　　细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞最易受损的-5～0℃，细胞仍能生长，活力受损不大。 　　目前常用的保护剂为二甲亚砜(DMSO)和甘油，它们对细胞无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞。 　　二、操作步骤 　　(一)冻存 　　1、消化细胞(同实验二)，将细胞悬液收集至离心管中。 　　2、1000rpm离心10分钟，弃上清液。 　　3、沉淀加细胞冻存液，轻轻吹打均匀，计数，调整至5×106/ml左右。 　　4、将悬液分至冻存管中，每管1 ml。 　　5、将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。 　　6、贴上标签，写明细胞种类，冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。 　　7、按下列顺序降温：室温→4℃(20分钟〕→冰箱冷冻室(30分钟)→低温冰箱(-30℃ 1小时)→气态氮(30分钟)→液氮。 　　注意：操作时应小心，以免液氮冻伤。液氮定期检查，随时补充，绝对不能挥发干净，一般30立升的液氮能用1～1.5月。 　　(二)复苏 　　1、准备一个茶缸或1000ml的烧坏，内装2/3杯37℃的温水。 　　2、从液氮中取出冻存管、迅速置于温水中并不断搅动。使冻存管中的冻存物在1分钟之内融化。 　　3、打开冻存管，将细胞悬液吸到离心管中。 　　4、1000rpm离心10分钟，弃去上清液。 　　5、沉淀加10ml培养液，吹打均匀，再离心10分钟，弃上清液。 　　6、加适当培养基后将细胞转移至培养瓶中，37℃培养，第二天观察生长情况。 　　三、试剂和器材 　　器材：液氮罐、冻存管(塑料螺口专用冻存管或安瓿瓶)、离心管、吸管、离心机等 　　试剂：0.25%胰酶、培养基、含保护剂的培养基(即冻存液) 　　北京诺博莱德科技有限公司位于北京市海淀区，是一家专业从事生化试剂、分子生物学试剂、实验耗材及实验仪器研发、销售、服务为一体的生物科技公司，公司主要经营的进口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz,Fermantas(MBI), NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等;产品涉及化工原料、生化试剂、分子克隆相关试剂、细胞培养及检测常用试剂、实验室常用耗材及仪器