全血基因组DNA提取试剂盒 NobleRyder D0923

　　北京诺博莱德科技有限公司供应全血基因组DNA提取试剂盒 NobleRyder D0923;现货供应全血基因组DNA提取试剂盒 NobleRyder D0923量大优惠 　　全血基因组DNA提取试剂盒 　　试剂盒组成 　　50T 　　200T 　　保存温度 　　RNaseA(10mg/ml) 　　500ul 　　2ml 　　-20℃ 　　蛋白酶K(10mg/ml) 　　500ul 　　2ml 　　-20℃ 　　红细胞裂解液(10×) 　　30ml 　　120ml 　　RT 　　裂解液 　　12.5ml 　　50ml 　　RT 　　结合液 　　25ml 　　100ml 　　RT 　　玻璃奶 　　2.5 　　10ml 　　RT 　　TE缓冲液 　　10ml 　　30ml 　　RT 　　原理简介 　　本试剂盒适用于各种动物抗凝全血样本，用于从中提取基因组DNA。独特的裂解缓冲液加上蛋白酶K等迅速去掉除DNA外的其他物质，并利用玻璃奶吸附DNA，进一步的去掉其他杂质，提取出来，得到的DNA可用于PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游应用实验。 　　注意事项 　　1.裂解液低温时可能出现析出和沉淀，可以在热水中温浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。 　　2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。 　　3.RNaseA经常使用可放2-8度保存，蛋白酶K请放-20度保存。 　　4.同一样本，如果想大量提取，可以增加样本量，并且每一步试剂加量，但使用次数会成倍减少。 　　操作步骤 　　在合适的容器中，用双蒸水将红细胞裂解液(10×)稀释成1×。即10ml溶液中加入90ml双蒸水混匀。 　　1.取不超过500ul抗凝血，加入三倍体积的稀释过的红细胞裂解液，混匀。放置2分钟，12000rpm离心1分钟。去上清。再加入2倍体积的红细胞裂解液，用移液器轻轻吹打沉淀，充分混匀，离心，弃上清，沉淀为白细胞。如果血液为家擒类动物，因为红细胞有核，所以可以省去此步，但加入的样品量不要超过50ul,直接进入下一步。 　　2.加入250ul裂解液，加入10μl RNase A(10mg/ml)溶液，振荡混匀，室温放置5-10分钟。 　　3.加入10μl蛋白酶K(10mg/ml)溶液，颠倒混匀，65℃放置10-30分钟，期间颠倒3-5次，小心内心管盖受热开启。如30分钟沉淀无法完全消失，请注意第6步处理。 　　4，在上清中加入三倍体积无水乙醇，充分混匀。 　　5.12000rpm离心5分钟，吸去上清，核酸在沉淀中。 　　6.沉淀中加入500ul结合液，65℃水浴1-2分钟，核酸沉淀可溶解(如无法完全溶解，可转移上清到一新的离心管中，弃沉淀)。 　　6.玻璃奶摇匀。加入50ul摇匀的玻璃奶，混匀，室温放置2分钟，10000转/分钟离心1分钟，去上清;沉淀加入1ml 70%乙醇，振荡混匀，10000转/分钟离心1分钟，去上清，70%乙醇重复洗一次，再用无水乙醇洗一次。去上清，再次离心2分钟，用小吸头吸去上清。 　　7.室温放置10分钟(如果玻璃奶加量，请适当延长放置时间，此步为去除残余酒精，以免影响下游实验)，加入50-100ul TE缓冲液混匀溶解，65℃水浴5分钟。离心，取上清为所提基因组。 　　8.电泳或者其他方法检测，进入下游实验。 　　北京诺博莱德科技有限公司位于北京市海淀区，是一家专业从事生化试剂、分子生物学试剂、实验耗材及实验仪器研发、销售、服务为一体的生物科技公司，公司主要经营的进口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz,Fermantas(MBI), NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等;产品涉及化工原料、生化试剂、分子克隆相关试剂、细胞培养及检测常用试剂、实验室常用耗材及仪器。