北京诺博莱德科技有限公司供应SDS-PAGE蛋白电泳套装 NobleRyder P0400;现货供应SDS-PAGE蛋白电泳套装 NobleRyder P0400量大优惠
SDS-PAGE蛋白电泳套装
名称
规格
保存条件
5×蛋白上样缓冲液(含DTT)
1ml
-20度
Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液
一包(10L)
RT
30%丙烯酰胺(29:1)
100mlX2
2-8度
1.5mol/LTris(pH8.8)
100mlX2
RT
1.0mol/LTris(pH6.8)
60ml
RT
过硫酸铵干粉
2g
RT
10%SDS
10ml
RT
TEMED
1.5ml
RT
说明书
一份
一份
产品简介
本公司提供的蛋白电泳套装包含凝胶制备，蛋白上样缓冲液及蛋白电泳上样缓冲液。
本公司生产的SDS-PAGE蛋白电泳套装是按照经典方法配制而成。本套装根据电泳体系的大小，可进行约50次左右。
使用说明：
一，前期工作：蛋白提取及定量。
二，蛋白上样液的制备：蛋白上样缓冲液解冻，轻轻混匀，按4体积蛋白样品加入一体积的5×蛋白上样缓冲液，混匀，沸水中水浴5分钟。
三，电泳液的配制：将一包电泳液干粉全部倒入1L-2L的烧柄中，加一定量的水溶解成2L配成5×Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液，用前再稀释5倍或者先配成1L成为10×Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液，用前再稀释10倍。
四，取10-15支1.5ml离心管，将过硫酸铵干粉分装成100mg/支，标记好备用。
五，凝胶制备：
1， 取一支称好的100mg过硫酸铵干粉，加入1ml蒸馏水，混匀，此配好的10%过硫酸铵溶液2-8度可保存一周，一周后请用新的。洗干净电泳玻璃板，夹好。
2， 根据目标蛋白分子量大小，选取凝胶浓度，按下表配制。先配分离胶，再配浓缩胶。
分离胶15%
分离胶12%
分离胶10%
分离胶8%
浓缩胶(5%)
总体积
10ml
10ml
10ml
10ml
5ml
30%丙烯酰胺(29:1)
5ml
4ml
3.3ml
2.7ml
0.83ml
1M Tris-HCL (PH6.8)
0
0
0
0
0.625ml
1.5M Tris-HCL(PH8.8)
2.5ml
2.5ml
2.5ml
2.5ml
0
10%SDS
100ul
100ul
100ul
100ul
50ul
ddH2O
2.3ml
3.3ml
4.0ml
4.6ml
3.42ml
10%过硫酸铵
100ul
100ul
100ul
100ul
75ul
TEMED
10ul
10ul
10ul
10ul
7.5ul
注意：
1，TEMED和10%过硫酸铵最后加，在加入前需混匀前面所加试剂。10%过硫酸铵在4℃有效期为一周，TEMED易挥发，使用后请盖紧瓶盖。在常温下胶30分钟内可以凝固，如温度过低，可放37℃温箱凝固。灌完分离胶后，轻轻的加1ml ddH2O封上层，胶凝固后可见到分界线。灌浓缩胶前，先倾去水层，再用吸纸吸干。浓缩胶灌好后立刻插入梳子。浓缩胶凝固后，放入电泳液中(让电泳液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，可防加样孔变形。
2，配制量可按上表等比加减。如果所用胶浓度与上面不同，可自行调整，主要是调整30%丙烯酰胺的量(需要浓度×总体积/30%)，最后用水补足总体积。
六，上样，电泳，一般是浓缩胶80V，分离胶120V恒压，等溴酚兰电泳到合适的位置，结束电泳，染色或者进行下一步实验。
附：SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围
SDS-PAGE分离胶浓度
最佳分离范围
6%胶
57-212kD
8%胶
36-94kD
10%胶
20-80kD
12%胶
12-60kD
15%胶
10-43kD
配制6%的PAGE分离胶
成分
所需各成分的体积(毫升)
凝胶体积
5
10
15
20
25
30
蒸馏水
2.6
5.3
7.9
10.6
13.2
15.9
30%丙烯酰胺混合液
1.0
2.0
3.0
4.0
5
6.0
1.5mol/L Tris(pH8.8)
1.3
2.5
3.8
5.0
6.3
7.5
10%SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
10%过硫酸铵
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
TEMED
0.004
0.008
0.012
0.016
0.02
0.024
配制8%的PAGE分离胶
成分
所需各成分的体积(毫升)
凝胶体积
5
10
15
20
25
30
蒸馏水
2.3
4.6
6.9
9.3
11.5
13.9
30%丙烯酰胺混合液
1.3
2.7
4.0
5.3
6.7
8.0
1.5mol/L Tris(pH8.8)
1.3
2.5
3.8
5.0
6.3
7.5
10%SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
10%过硫酸铵
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
TEMED
0.003
0.006
0.009
0.012
0.015
0.018
配制10%的PAGE分离胶
成分
所需各成分的体积(毫升)
凝胶体积
5
10
15
20
25
30
蒸馏水
1.9
4.0
5.9
7.9
9.9
11.9
30%丙烯酰胺混合液
1.7
3.3
5.0
6.7
8.3
10.0
1.5mol/L Tris(pH8.8)
1.3
2.5
3.8
5.0
6.3
7.5
10%SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
10%过硫酸铵
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
TEMED
0.002
0.004
0.006
0.008
0.01
0.012
配制12%的PAGE分离胶
成分
所需各成分的体积(毫升)
凝胶体积
5
10
15
20
25
30
蒸馏水
1.6
3.3
4.9
6.6
8.2
9.9
30%丙烯酰胺混合液
2.0
4.0
6.0
8.0
10.0
12.0
1.5mol/L Tris(pH8.8)
1.3
2.5
3.8
5.0
6.3
7.5
10%SDS
0.05
0.1
0.015
0.2
0.25
0.3
10%过硫酸铵
0.05
0.1
0.015
0.2
0.25
0.3
TEMED
0.002
0.004
0.006
0.008
0.01
0.012
配制15%的PAGE分离胶
成分
所需各成分的体积(毫升)
凝胶体积
5
10
15
20
25
30
蒸馏水
1.1
2.3
3.4
4.6
5.7
6.9
30%丙烯酰胺混合液
2.5
5.0
7.5
10.0
12.5
15.0
1.5mol/L Tris(pH8.8)
1.3
2.5
3.8
5.0
6.3
7.5
10%SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
10%过硫酸铵
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
TEMED
0.002
0.004
0.006
0.008
0.001
0.012
3. 按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称上层胶、积层胶或堆积胶)
配制不同体积的浓缩胶
成分
所需各成分的体积(毫升)
凝胶体积
2
3
4
5
6
8
蒸馏水
1.4
2.1
2.7
3.4
4.1
5.5
30%丙烯酰胺混合液
0.33
0.5
0.67
0.83
1.0
1.3
1.0mol/L Tris(pH6.8)
0.25
0.38
0.5
0.63
0.75
1.0
10%SDS
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.08
10%过硫酸铵
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.08
TEMED
0.002
0.003
0.004
0.005
0.006
0.008
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