概述：

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus, HCV)感染而引起的严重威胁人类健康的重大流行性传染病。全球约有2.27亿HCV感染者, 我国HCV感染者在4000万以上，大约20%可以自然清除,80%发展为HCV慢性感染，10-20%的HCV慢性感染会进一步发展为慢性进行性肝病,包括肝硬化、肝细胞癌等。
丙型肝炎感染被称为“静默感染”，是一种无症状的感染。大部分病人直到出现肝硬化甚至肝癌时，才发现自己患有丙型肝炎。因此， 如何早期发现和治疗这种疾病就成为一个非常重要的问题。
HCV的检测指标主要是丙肝抗体和HCV RNA。从HCV感染到丙肝抗体的检出，大约有70天的“窗口期”。HCV RNA检测具有早期、敏感和特异等特点，但检出率较低, 在技术和设备上要求较高，也费时，限制了普遍应用。
HCV感染者血清中HCV抗原(HCAg)是丙肝病毒复制的一个直接标志物，大约感染一周即可出现，其平均检出时间比HCV RNA的检出时间晚一天左右，可应用于HCV感染患者的早期发现。目前，美国雅培公司研发的丙型肝炎核心抗原的检测试剂仅用于科研； 我国有两家企业研发的检测人血清中HCV核心抗原的试剂盒已在临床展开应用。
HCV归属于肝炎病毒属(Hepacivirus),黄病毒科(Flaviviridae)，病毒体呈球形,为单股正链RNA病毒。HCV-RNA全长约为9.6kb,包括一个位于基因中央的开放阅读框(ORF)。该阅读框编码3000多氨基酸的前体多聚蛋白,其通过宿主和病毒的蛋白酶作用被切割成10个具有独立功能的HCV蛋白,根据功能的不同分别命名为核心蛋白Core (C),包膜蛋白(envelope protein)1、2(E1、E2), p7和非结构蛋白(non structural protein) NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B。 核心蛋白由于保守性好，多被用来检测丙肝病毒抗原；NS3由于其酶活性涉及到病毒的复制，而成为目前抗病毒治疗的的一个重要靶点。
由于丙型肝炎病毒的高度变异性，人们在设计测定丙肝抗原的试剂盒时， 自然地把注意力集中在病毒基因序列相对保守的结构蛋白核心抗原。因此， 目前商品化的试剂盒都是针对核心抗原， 忽略了非结构蛋白NS3抗原作为抗原靶点的可行性。最近国外有报道：NS3抗原区域具有相对保守的抗原决定簇和较高的抗原性，是目前HCV抗体诊断试剂盒的关键抗原。
本公司在前期研究工作的基础上，在国内外首先建立了以NS3为抗原靶点的HCVNS3抗原测定试剂盒，获得了较好的临床检测效果。与国内商品化的检测HCV核心抗原的试剂盒进行比较，具有产品质量稳定、灵敏高，假阳性率低和耗时短的优点。同时，应用NS3诊断试剂盒， 我们测定出的HCVNH3阳性患者中包括了目前我国发现的丙肝患者的各种基因亚型。结果显示： 我们针对NS3抗原靶点的诊断试剂盒适用于我国人群。
丙型肝炎NS3蛋白是HCV病毒复制中重要的功能蛋白之一,具有丝氨酸蛋白酶,解旋酶和NTP酶活性。 NS3/4A蛋白酶高度保守，是HCV进行循环复制所必须的，这个区域已成为第一个直接抗病毒（DAA）治疗的靶点和抗HCV药物治疗研究的重要方向。据此研发出的NS3/4A蛋白酶抑制剂给难治性丙肝带来了希望， 同时，也对在应用NS3/4A蛋白酶抑制剂（ 如Simprevir类药物）时， 如何确切地监测患者体内病毒的变化提出了新的挑战。
在最近的临床研究中，本公司研发的试剂盒被用来监测NS3/4A蛋白酶抑制剂的治疗效果。结果显示：本试剂盒能够及时地监测到患者血清中先于HCV-RNA变化的NS3的变化，及早的提示治疗效果。这一点更是本试剂盒的创新之处。

二 临床研究

1、通过前期研发工作，我们建立了应用酶联免疫技术（ELISA）定量测定HCV-NS3抗原的方法。根据该方法建立的诊断试剂盒具有产品质量稳定、灵敏高，假阳性率低和耗时短的特点。目前已经完成1245例临床样本的检测，HCV RNA的阳性率为45%，HCV NS3的阳性率为59%，与HCVRNA阳性重合率为80%。
2、本试剂盒针对HCV-NS3抗原检测丙肝病毒感染为国内外首创
目前，国内外已有的丙肝抗原检测试剂只针对核心抗原(HCV-CAg)。本公司产品丙型肝炎病毒NS3抗原测定试剂盒（酶联免疫法），针对丙肝非结构蛋白NS3，可以较好地避免丙型肝炎漏诊的发生，具有早期诊断丙型肝炎病毒感染的临床价值。
 3、 本试剂盒预期可用于临床抗病毒治疗的疗效监测
我国目前HCV感染的标准治疗方案仍有相当一部分患者不能治愈或者不能耐受，针对HCV生命周期中病毒蛋白靶向特异性治疗的许多小分子药物（DAAs）得到了迅速发展，提高了抗病毒的疗效，这些药物包括非结构蛋白NS3/4A蛋白酶抑制剂，2011年以来，已经陆续在美国和欧洲等地上市，我国已有患者应用DAAs进行治疗。
在对 319 名丙肝患者进行针对NS3的药物(Simprevir)疗效的对比研究中，应用本试剂盒监测患者治疗效果，结果发现；丙肝患者在接受针对NS3治疗时，在监测治疗效果方面，本试剂盒显示出较HCV-RNA检测方法更高的灵敏度，可以作为临床抗病毒治疗、预后及疗效监测的辅助指标。
4、本试剂盒的监测范围覆盖了我国丙肝患病人群的基因亚型
丙型肝炎核心抗原由于序列的保守性成为在丙型肝炎诊断试剂盒设计方面的首选。 而抗原性较强的NS3作为抗原靶点来设计诊断试剂盒是否会漏检我国人群基因亚型丙肝患者诊断，是我们必须回答的问题。
基因分型结果分析：通过对242份HCV-NS3抗原阳性样品的基因分型结果进行统计，1b型178份，占73.6%，2a型53份，占21.9%，3a型4份，占1.7%，3b型5份，占2.1%，6a型2份，占0.8%，说明本试剂可以覆盖在我国流行的HCV主要基因型。
5、本试剂盒的检测效果优于国内的类似产品
目前，国内外还没有针对HCV-NS3抗原检测的试剂盒。国内仅有两家公司应用酶联免疫法（ELISA）开发了临床HCV核心抗原定性检测试剂盒。 经我们大量的临床试验证明：本试剂盒的检测效果明显优于上述两家公司的产品，具有检出率高，假阳性率低，测定耗时短等优点。

[产品名称]
通用名：丙型肝炎病毒NS3抗原测定试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Diagnostic Kit for NS3Antigen Of Hepatitis C Virus（ELISA）
 
[包装规格]
96人份/盒
 
[预期用途]
丙型肝炎病毒NS3抗原检测试剂盒（酶联免疫法）用于人血清中丙型肝炎病毒NS3抗原的定量测定。 适用于丙型肝炎病毒感染的“窗口期”， 密切接触者早期初步排查，治疗期，患者体内病毒水平监测。特别是监测针对NS3治疗时患者体内病毒的水平变化，以达到随时了解治疗效果的目的。
 
[检测原理]
丙型肝炎病毒NS3抗原检测试剂盒（酶联免疫法）采用双抗体夹心法对HCV-NS3抗原进行检测。首先，在两种抗丙肝病毒单克隆抗体包被（单克隆抗体1号5号包被）的酶标板中，加入待测血清和对照品，适当反应后，再加入另一种HCV-NS3单克隆抗体（单克隆抗体2号）与辣根过氧化物的酶结合物，然后，与酶的底物作用而显色，显色强度与样本中HCV-NS3的浓度相关。
 
 [检测方法的局限性]
1.本试剂盒适用于人血清样本的测定。
2.血液样本未完全凝集，或样本受到污染均不能用于检测。
3.应用新鲜样本进行检测，避免使用长期贮存或反复冻融的样本。
4.本试剂仅用于定性检测人血清样品中总的HCV NS3抗原。
 
[注意事项]
1.全部试剂应避光贮存于2～8℃，使用前应在室温（17～27℃）平衡至少30分钟。未用完的微孔板条用自封袋密封保存，防止受潮。
2.微量移液器应定期校准，确保加样准确。
3.手工加样时，每次应更换吸头取样本。
4.在操作过程中尽量避免微孔中产生气泡。
5.浓缩洗涤液如果有结晶，放置于37℃充分溶解后稀释混匀使用。
6.封板胶纸不能重复使用。
7.用洗板机洗板时应经常检查液头是否堵塞。如果手工洗板，请勿使用带纸屑的吸水材料拍板，应用干净的吸水纸，吸水纸请勿反复使用。
8.洗板机每次使用后应用蒸馏水或去离子水冲洗干净，以免管路堵塞或腐蚀。
9.严格按照说明书进行操作，不得混用不同批次试剂。
10.如果皮肤或眼睛接触任何试剂，必须用大量清水冲洗和消毒。
11.本试剂盒内所有试剂和临床标本都应视为有潜在传染性，请按有关规定严格执行，防止交叉感染。
12.同一次实验不要使用不同批次的试剂。
13.酶结合物、底物见光分解，使用完尽快避光保存。
14.实验过程中避免酶标板干燥，清洗后请尽快加试剂。
 
[产品性能指标]
1.检测范围：1-660ng/ml。
2.校准曲线相关系数r：≥0.9900。
3.最低检测限（分析灵敏度）：使用同批号试剂对零浓度校准品进行20次重复检测，平均值加2倍SD（≥95%置信区间）即确定为本试剂盒的最低检测限：1ng/ml。
4.精密度：批内变异系数≤15.0%，批间变异系数≤15.0%。
 
 [临床研究]
1、 在对1245例临床乙型肝炎患者血清样本的检测中， 应用本试剂盒测得HCV-NS3抗原阳性率为59%，与HCV-RNA阳性重合率为80%，与抗-HCV阳性重合率为64%。
      2、在对 319 名丙肝患者进行针对NS3的药物(Simprevir)疗效的对比研究中，应用本试剂盒监测患者治疗效果，结果发现；丙肝患者在接受针对NS3治疗时，在监测治疗效果方面，本试剂盒显示出较HCV-RNA检测方法更高的灵敏度。
 3、基因分型结果分析：通过对242份HCV-NS3抗原阳性样品的基因分型结果进行统计，1b型178份，占73.6%，2a型53份，占21.9%，3a型4份，占1.7%，3b型5份，占2.1%，6a型2份，占0.8%，说明本试剂可以覆盖在我国流行的HCV主要基因型。
 

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