葡聚糖凝胶G-15

葡聚糖凝胶 G-15（ Bio-sep G-15）

产品说明

     葡聚糖凝胶是一种具有三维网状结构的高分子化合物 , 它是由葡聚糖加入交联剂环氧氯丙烷通过醚键互相交联聚合而成的，交联度越大，网孔结构就越紧密，吸水后的体积膨胀就越小，能允许进入凝胶内部的分子的分子量也就越小，反之亦然。层析时，大于凝胶孔径的大分子，被阻于凝胶相外，沿着凝胶颗粒之间的间隙走，下移速度最快，故最先洗脱下来，中分子物质部份进入凝胶内部，洗脱速度为其次，而小分子物质因全部进入凝胶，受到阻力最大，故最后被洗脱下来，如此物质得到分离。

  1 化学和物理性质

    葡聚糖凝胶 G-15 是一种球状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀。型号 G 表明每克于凝胶吸水量的多少， G-15 表明每克干凝脱胶吸水 1.5毫升。这表征了凝胶所能膨胀的倍数，亦间接表征了凝胶孔径的大小。 葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。

1.1 化学稳定性

   葡聚糖凝胶 G-15 不溶于一切溶剂（除非它被化学降解）。它在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的，在强酸中凝胶骨架的糖苷键被水解。长期接触氧化剂将破坏凝胶，因而应避免使用。

1.2 物理稳定性

   葡聚糖凝胶 G-15 并不熔融，可以在湿态、中性 PH 进行灭菌或在高压灭菌器 120℃、 30 分钟而不影响它的色谱性质。干态的凝胶加热至 120 ℃以上将开始焦糖化。

2 产品说明                                                                                                                   

2.1 交联葡聚糖凝胶微球 G-15 的脱盐实验研究

固定上样量 50μl ，分别以 15, 30, 60, 90 cm/h 的流速洗脱，色谱图如图所示：

    流速 375px /h ，进样量 50μl              流速 750px /h ，进样量 50μl

    流速 1500px /h ，进样量 50 μl              流速 2250px /h ，进样量 50 μl

3 使用方法

3.1 乙醇浸泡

  在室温下，将干粉浸泡于 50-60% 乙醇中至少 24 小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用去离子水洗去残存的乙醇滤干。

3.2 去离子水浸泡

   室温下，在去离子水中充分溶胀 24 小时，间隙搅拌，以保证凝胶的完全溶胀。

3.3 盐酸浸泡

    在常温下再用 0.2N HCl 浸泡 12 小时，间隙搅拌，滤干，水洗至中性。

3.4 装柱

  将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层。

3.5 平衡

   上样前平衡层析柱至少 3-5 个柱体积直到基线变得平稳为止（流出液的 PH 值等于上柱的 Buffer 的 PH 值）

3.6 上样

    凝胶过滤的上样量一般为 5% 的柱床体积，我们建议初次上样控制在 1-2% 的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到 20% 的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在 40-50 cm

以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为 5 ： 1 即可。

3.7 洗脱方法

   可以用去离子水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱 Buffer 中加入 NaCl 等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化。

3.8 在位清洗（ CIP ）

凝胶使用十次后作一次 CIP ，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以 1000px/h 用 1M 氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。