急性肾损伤NGAL ELISA Kit

急性肾损伤NGAL ELISA Kit

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白快速检测酶免试剂盒，可用于人尿液、血浆和血清。急性肾功能衰竭（ARF）是心脏手术、肾毒性、肾移植常见的并发症。中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL），也称为Lipocalin-2（脂质运载蛋白-2），是脂质运载蛋白家族的一个新成员，它是肾功能损伤早期的生物标志物。NGAL不仅仅存在于嗜中性粒细胞中，也会出现在特定的上皮细胞内，例如发生缺血性和毒性肾损伤过程中，肾小管上皮细胞中的NGAL将显著增加，在开始的两个小时内，尿液和血液中NGAL水平将显著增加，因此NGAL是早期急性肾损伤的敏感标志物。



【临床意思】

急性肾功能损伤过程中NGAL 水平偏高，预后将发展成为急性肾功能衰竭。NGAL水平偏高通常出以下情况：心血管手术患者、病危人员、脓血性或出血性休克、肾移植、静脉X射线造影剂的反应和肾毒性治疗反映。50%以上的病人都会出现一定程度的急性肾功能衰竭，通常大病后期出现使得死亡率大大增加。急性肾衰竭的预后一直没有得到改善，在今后的四十年里将引起显著关注。通用的诊断方法如测定血清肌酐或者半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)都只能在肾功能退化后检测出，那只能损伤后一天甚者几天内检测。用NGAL蛋白快速检测酶免试剂盒，医生可在损伤几小时内对急性肾功能障碍做适当的处理。

Bioporto Diadnostics的研究表明，健康志愿者尿液中NGAL含量检测结果分布0.7-9.8ng/ml，平均值为5.3ng/ml，。而血浆中的含量检测结果为37-106ng/ml，平均值为63ng/ml。当肾损伤后，NGAL水平将迅速陡增。随机检测重病患者，尿液NGAL的浓度为110ng/ml 到40000ng/ml不等。而他们EDTA抗凝血浆检测结果为25ng/ml到3491ng/ml。根据急性肾衰竭患者检测的90%阳性预测值判断，尿液中NGAL的阳性判断值为350ng/ml，而血浆检测的阳性判断值为400ng/ml.



【试剂盒特异性】

在标准实验室内，使用常规的ELISA设备即可在4个小时内得到检测结果。所有的组分物质需4℃保存，孵育操作室温即可。该试剂盒提供即用型的标准品、试剂和包被好的板条，可节省操作的时间，操作简单，分析快捷，且操作可重复性好。

操作简单，分析快捷

可检测尿液，血浆和血清

可重复性操作好，使用方便

即用的标准品和稀释液

包被好的ELISA板室温孵育

所有的组分可在四度保存

仅需要常规的ELISA设备即可。

【试剂盒组成】

包被的可拆式12*8酶标板---------------------------------------------96孔

5×样品稀释浓缩液----------------------------------------------------1*60ml

NGAL标准品1-6，每个瓶子上标签上均标有鉴定的准确浓度---------------6*1ml

25×清洗浓缩液-------------------------------------------------------1*30ml

HRP标记的NGAL抗体-----------------------------------------------1*6ml

TMB缓冲液--------------------------------------------------------- 1*12ml

终止液--------------------------------------------------------------1*16ml

【实验步骤】

试剂准备

1. NGAL一抗包被的ELISA板和反映试剂，恢复室温（20-25度）后使用，试剂注意摇匀，如果有少量沉淀，请低速离心。

2. 对照品放置于2-8度备用，一般国际上实验室检测时对照品一般是做复孔，准备12个孔。

3. 清洗液的准备：用双蒸水将清洗液进行25倍进行稀释，即30ml→750ml，混匀之后2-8度备用。

4. 样本稀释液：将5倍的样品稀释液60ml用双蒸水将清洗液进行25倍进行稀释，即60ml→300ml，混匀之后2-8度备用。如果不是一个ELISA板都一次性使用，可取少量稀释，加4倍体积的双蒸水即可。

5. NGAL标准蛋白，HRP-NGAL，TMB和终止液不需要稀释。

样品的准备：

标准曲线的范围为0.2-20ng/ml，血浆和血清的检测范围为100-500ng/ml，尿液的范围为50-500ng/ml，所以一般血清和血浆做1：100稀释，而尿液样本的稀释度1：50，即血清和血浆可以10ul加990ul的样本稀释液，而尿液样本的加液为490ul，倒置混匀或蜗旋器混匀均可。样品的检验灵敏度必须在最低值和最高值之间。样品的稀释度不得低于1：25。

操作流程：

1. 熟悉实验操作protocol，准备酶标仪450nm，650nm（非必须）或620nm（非必须），空白对照请加50ul样本稀释液。

2. 用稀释板稀释样本， 1：100的血清和血浆稀释，1：50的尿液稀释，混匀

3. NGAL标准蛋白，每孔50ul，至于稀释板中

4. HRP-NGAL：每个反应孔加样50ul，用多道移液器将稀释板中的样本和标准蛋白50ul移至反应板中。

5. 酶标板加盖后，室温孵育30min，200/minute摇匀。

6. 甩尽ELISA板内溶液，用清洗液清洗三次，300ul每孔，甩干后在纸上拍干，最后一次清洗请浸泡1min。充分的清洗是为了最后的显色。手动加样，比较温和，有时容易引起高背景，可以用多道移液器清洗，也可以使用洗板机进行清洗。

7. 用多道移液器加TMB显色液100ul至每个反应孔，开始加样，请定时15min，加样结束后蔽光室温孵育15min。

8. 加100ul终止液结束反应，轻轻摇匀20sec，避免溢出，在30min内读数。

9. 酶标仪450nm吸光度读取OD值，参比波长650 nm或620nm，如果没有，可以参考空白对照值。

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货号

品名

种属

样本

检出限

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