羊抗人IgG荧光抗体
常用标签包括有Flag、myc、HA、His、GST、GFP、MBP等。
Flag标签系统利用一个短的亲水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目标蛋白;其纯化条件是非变性的,因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。
His标签是由6个组氨酸(His-His-His-His-His-His)组成的短肽,专门设计用于重组蛋白的吸附纯化。由于分子量小,且较容易分离和纯化,是目前使用最广泛的一种。
GST标签体系具有蛋白表达率高,表达产物纯化方便,利于GST抗体制备的特点。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可从细菌裂解液中提取,在不变性的条件下通过亲和层析得到。
GFP或其突变体EGFP等广泛用于基因表达效率的检测,以及和目的蛋白融合表达用于检测目的蛋白的表达和分别。GFP抗体不经可以检测GFP或其适当的突变体,也可以检测和GFP或其适当的突变体融合表达蛋白的表达、细胞内定位,以及纯化、定性或定量检测GFP融合表达蛋白等。
Myc标签(序列为:EQKLISEEDL)已成功应用于WB杂交技术、免疫沉淀IP和流式细胞术中。因此可用于检测重组蛋白在细菌、酵母、昆虫细胞和哺乳细胞中的表达情况。Myc重组蛋白质可通过偶联Myc标签抗体到活化的琼脂糖上而进行亲和纯化。但Myc重组蛋白的低pH洗脱条件往往会降低蛋白质的活力,因此Myc标签系统广泛应用于检测但很少用于纯化。
HA标签系统利用一个HA(influenza hemagglutintin epitope:YPYDVPDYA)短肽融合到目标蛋白。HA标签可位于蛋白质的C端或N端,该系统已广泛应用于多种细胞类型,相应的HA标签抗体也被广泛运用。
MBP标签蛋白大小为40kDa,由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达,MBP可以融合在蛋白的N端或C端。可用MBP抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测MBP标签标记的重组蛋白。
其余标签抗体还有V5、GFP、RFP、β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、ERK1、AU1、Avi、B、CBP、DDDDK、E、E2、Glu-Glu、HAT、HPC4、HSV、KT3、KLH、MAT、Protein A、S、S1、SNAP、SRT、NWSHPQFEK、SUMO、T7、Tag-100、TAP、Trx、Ty1、TF、Universal、VSV-G等,但应用相对较少。
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血清解冻最好采用逐步解冻法(-20℃-2—8℃-25℃或37℃),解冻过程中必须随时轻摇,使血清受热温度均匀。
血清凝絮物,血清解冻后会出现少量片状或絮状物析出,这主要是由于血清内不稳定蛋白变性、纤维蛋白析出形成沉淀物,实验证明沉淀物不会影响血清本身质量。
热灭活本产品除注明外均未灭活。如果必须灭活,请严格按照56℃30分钟(水浴)处理已解冻血清。
常温状态下短期融化并不会影响血清质量。
产品有效期,检定合格之日起有效期5年。
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