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  • 上海笃玛生物科技有限公司
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    笃玛 草酸钾抗凝羊血 介绍

    • 药智价格:
      1
    • 发布时间:
      2018-07-13 17:02:12
    • 供  应 商:
      上海笃玛生物科技有限公司
    • 供应分类:
      实验用品
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    草酸钾抗凝羊血
    标本要求
    1. 血清:
    室温血液自然凝固10-20 分钟后,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保
    存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
    2. 血浆:
    应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心20
    分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
    3.尿液:
    用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀
    形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
    4.细胞培养上清:
    检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。
    5.培养细胞:
    检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100 万/ml 左右。
    通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左
    右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
    6.组织标本:
    切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化
    后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀
    浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检
    测,其余冷冻备用。
    7.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进
    行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
    8.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

    草酸钾抗凝羊血

    操作步骤
    试管法(改良 Mayer 法)
    1、致敏羊红细胞: 2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素( 1:2000),混匀,置 37℃水浴 30min。
    2、稀释血清:待测血清 0.2ml,加应用液 3.8ml,稀释度为 1:20。
    3、配制溶血标准管:全溶血管:2%绵羊红细胞 2ml 加 8ml 蒸馏水,混匀。
                       50%溶血管:取全溶血管液 2ml 加缓冲液 2ml。
    4、按表所示,依次加各成分于试管中,混匀,置 37℃水浴 30min, 第 10 管为非溶血对照:补体 CH50 测定试管法
     
    5、结果测定:取出试管, 2000r/min 离心 10min,对照管应不溶血。肉眼比色,选与 50%溶血标准管相近二管,再用分光光度计测(波长 542nm、 0.5cm 比色杯) OD 值,
    确定与标准管最接近者为终点管,然后按下公式计算 CH50 值:
              血清补体 CH50( U/ml) =( 1/血清用量)×稀释度。
    如第 5 管为终点管,测待测血清中CH50为66.7U/ml。血清补体CH50正常值为50-100U/ml。

    草酸钾抗凝羊血
    标本的采集及保存
    1.血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
    2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
    3.细胞培养物上清或其它生物标本:1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
    注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
    标本的稀释原则:
    首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。最后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。
    标准品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为300 pg/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml,临用前15分钟内配制。
    如配制150 pg/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
    生物素标记抗体的稀释原则:
    临用前以生物素标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
    辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:
    临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。

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